细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后,会导致蛋白之间的交联(cross-link),许多氨基酸残基在分子内或分子间形成了醛键,使得不少抗原决定簇被封闭,导致免疫染色时染色信号减弱,甚至出现一些假阳性染色结果。 贝博® BBproExtra®柠檬酸钠抗原修复液(Citrate Antigen Retrieval Solution)是一种最常用的抗原修复液,可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。 本抗原修复液采用了广泛使用的柠檬酸钠缓冲液(pH6.0),可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联,充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。 石蜡切片都需进行抗原修复处理,抗原修复会大大改善石蜡切片的免疫染色效果。冰冻切片可以不进行抗原修复处理,但当冰冻切片免疫染色效果欠佳时,可以考虑尝试进行抗原修复,修复后免疫染色效果会有显著改善。 按照每个片子需要10ml抗原修复缓冲液(1x)计算,100ml抗原修复缓冲液(50x)可以用于500个样本的抗原修复。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。
2.拆封后请尽快使用完!
2.纯水
3.免疫染色洗涤液
2.注意加热过程液面不要低于片子,要防止切片干燥,热处理后应注意自然冷却。
3.一批抗原的检测其温度和时间一定保持一致。
4.浸泡在抗原修复缓冲液(1x)中,最佳的加热时间需1.根据不同的样品和目的蛋白自行摸索。
5.用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。
一、石蜡切片:
1. 脱蜡:
切片在二甲苯中脱蜡3~5分钟,再换用新鲜的二甲苯脱蜡,共用二甲苯脱蜡3次;
无水乙醇3~5分钟,两次;
95%乙醇3~5分钟,一次;
90%乙醇3~5分钟,一次;
80%乙醇3~5分钟,一次;
70%乙醇3~5分钟,一次;
蒸馏水冲洗3~5分钟,两次。
2. 抗原修复:
用免疫染色洗涤液洗涤切片5min;
将切片浸泡在抗原修复缓冲液(1X)中,95-100℃加热约20分钟(加热时间可以控制在10-30分钟内,最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。
抗原修复液(1X)使用前需预热到95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅,也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热,需注意避免沸腾和过多的水分蒸发,可在高火加热液体至所需温度之后,将微波炉打到低火上。随后取出自然冷却至室温。
用免疫染色洗涤液洗涤1-2次,每次3-5,min。
随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。
二、冰冻切片:
用免疫染色洗涤液洗涤切片5分钟。
将切片浸泡在抗原修复液(1X)中,95-100℃加热约20分钟(加热时间可以控制在10-30分钟内,最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。
抗原修复液(1X)使用前需预热到95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅,也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热,需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20-30分钟内冷却至室温。
用免疫染色洗涤液洗涤1-2次,每次3-5分钟。
随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。
三、其他样本:
对于其它样品的抗原修复,可以参考石蜡切片或冰冻切片的步骤进行。
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