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产品概述
product description
磷酸化是细胞信号传递系统的组成部分,在许多生命活动中扮演重要角色,如基因与代谢活动的调节,细胞分化,肿瘤形成,细胞周期现象,由生长因子和激素激发的信号传递等。 贝博® BBproExtra® 真菌磷酸化蛋白提取试剂盒适用于从各种真菌细胞和实体组织中提取磷酸化蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。 本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
磷酸化蛋白质谱,2-D,IEF,
WB,IP,EMSA等
WB,IP,EMSA等
适用样本
真菌
产品特点
1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2.将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
磷酸化蛋白质谱,2-D,IEF,
WB,IP,EMSA等
WB,IP,EMSA等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
使用方法
新鲜样本：
1. 提取液准备：
每500 μl冷的提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取清洗干净的100-200 mg新鲜真菌组织/细胞样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入500 μl提取液A后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
3. 将匀浆液吸入一个预冷的干净离心管中在4℃振荡30分钟-1小时。
4. 在4℃，12000×g条件下离心10-15分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到真菌蛋白。
6. 上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
冻存样本：
1. 冻存样本参照上述样本步骤操作。
2. 冻存样本中直接加入5-10倍体积的蛋白提取液，振荡30分钟。
3. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
5. 上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
1. 提取液准备：
每500 μl冷的提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取清洗干净的100-200 mg新鲜真菌组织/细胞样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入500 μl提取液A后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
3. 将匀浆液吸入一个预冷的干净离心管中在4℃振荡30分钟-1小时。
4. 在4℃，12000×g条件下离心10-15分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到真菌蛋白。
6. 上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
冻存样本：
1. 冻存样本参照上述样本步骤操作。
2. 冻存样本中直接加入5-10倍体积的蛋白提取液，振荡30分钟。
3. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
5. 上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
参考文献
1.Na Zhao, Xinyue Xu, Yashitola Wamboldt, Sally A. Mackenzie, et al.
MutS HOMOLOG1 silencing mediates ORF220 substoichiometric shifting and causes male sterility in Brassica juncea
Journal of Experimental Botany 2016 67 (1): 435-444. （IF=5.677）
2.XiaokangLi, LiMu, DandanLi, et al.
Effects of the size and oxidation of graphene oxide on crop quality and specific molecular pathways
Carbon 2018 （IF=7.082）
MutS HOMOLOG1 silencing mediates ORF220 substoichiometric shifting and causes male sterility in Brassica juncea
Journal of Experimental Botany 2016 67 (1): 435-444. （IF=5.677）
2.XiaokangLi, LiMu, DandanLi, et al.
Effects of the size and oxidation of graphene oxide on crop quality and specific molecular pathways
Carbon 2018 （IF=7.082）
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