核蛋白和胞质蛋白提取试剂盒

BB-31122
选择规格
  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥600元
  • ¥1000元
数量
产品概述 product description

贝博® BBproExtra® 胞质蛋白和核蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取核蛋白和胞质蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。制备的核蛋白和胞质蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞核膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
动物细胞/组织
产品特点
1.使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.提取过程简单方便。
3.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.蛋白提取液含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白和膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项:
 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
 如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测,提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,注意提取过程保持低温操作,缩短离心时间。
使用方法
细胞蛋白提取
1. 提取液准备:
每200 μl蛋白提取液A中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
每200 μl蛋白提取液B中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞,在4℃,1000×g条件下离心5分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每20 μl体积细胞沉淀(约20 mg,2×106个细胞)中加入200-300 μl冷的提取液 A,高速涡旋振荡15秒或吹打混匀,置2-8℃条件振荡15-30分钟。
5. 然后在4℃,1000×g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞质蛋白,请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次,在4℃,1000×g条件下离心5分钟,弃上清。
8. 在沉淀中加入200 μl冷的提取液B,高速涡旋振荡5秒。
9. 置2-8℃条件振荡30分钟,至沉淀明显减少甚至无明显沉淀。
10. 在4℃,14000×g条件下离心10分钟。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。
12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

组织蛋白提取
1. 提取液制备:
每200 μl蛋白提取液A中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
每200 μl蛋白提取液B中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取适量组织样本,用手术剪刀尽可能剪碎,加冷PBS,用组织匀浆机/匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体,冰上静置5分钟,小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
3. 在4℃,500×g条件下离心5分钟,弃上清。
4. 每20 mg组织(20-30 μl细胞沉淀体积)中加入200 μl冷的提取液 A,高速涡旋振荡15秒或吹打混匀,置2-8℃条件振荡20-30分钟。
5. 然后在4℃,1000×g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞质蛋白,请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次,在4℃,1000×g条件下离心5分钟,弃上清。
8. 在沉淀中加入100-200 μl冷的提取液B,高速涡旋振荡5秒。
9. 置2-8℃条件振荡30-40分钟,至沉淀明显减少甚至无明显沉淀。
10. 在4℃,12000×g条件下离心10分钟。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。
12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.细胞裂解速度慢?
为了充分保证提取得到的蛋白的活性,提取液采用独特的保护蛋白的配方,裂解能力温和,下游应用范围广。
适当延长裂解时间。

2.蛋白浓度低?
处理部分组织样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A和试剂B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

3.用什么方法定量蛋白?
建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。
参考文献
1.Pingli Li, et al.
Preparation and in vitro immunomodulatory effect of curdlan sulfate
Carbohydrate Polymers 2014 (IF=6.044)

2.Guang Yu, Tonghai Yan et al.
Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic detention of I2PP2A/SET in Alzheimer disease
Neurobiology of Aging 2013 (IF=6.189)

3.Wan Li, et al.
Anti-inflammatory effects of Morchella esculenta polysaccharide and its derivatives in fine particulate matter-treated NR8383 cells
International Journal of Biological Macromolecules 2019 (IF=4.784)

4.Mengjuan Wu, et al.
Phosphorylation of SET mediates apoptosis via P53 hyperactivation and NM23-H1 nuclear import
Neurobiology of Aging 2018 (IF=5.117)

5.Xiaoling Ma, et al.
Staphylococcal Panton-Valentine Leukocidin Induces Pro-Inflammatory Cytokine Production and Nuclear Factor-Kappa B Activation in Neutrophils
PloS one 2012 (IF=4.411)

6.Jinchun Qian, et al.
Ophiopogonin D prevents H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cells
Journal of Ethnopharmacology 2010 (IF=3.014)

大包装和定制包装服务