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产品概述
product description
内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。 贝博® BBproExtra® 内质网蛋白提取试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的内质网蛋白的提取。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
动物细胞/组织
产品特点
1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.提取过程简单方便。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2.提取过程简单方便。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
使用方法
细胞内质网蛋白提取：
1. 提取液制备：
每200 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
3. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 加入500μl冷的试剂 A，置冰上10分钟。
5. 用Dounce匀浆器匀浆充分匀浆。
6. 匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，取上清。
7. 将上清在4℃，11000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，取上清。
8. 将上清在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，留沉淀。
9. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。
10. 在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，留沉淀。
11. 沉淀中加入100-200 μl蛋白提取液C，充分混匀。
12. 在4℃条件下振荡20-30分钟。
13. 即得到内质网蛋白样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
组织内质网蛋白提取：
1. 提取液制备：
每200 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
3. 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
4. 加入500μl冷的试剂 A，置冰上10分钟。
5. 用Dounce匀浆器充分匀浆30-40下，至无明显固体团块。
6. 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，取上清。
7. 将上清在4℃，11000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，取上清。
8. 将上清在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，留沉淀。
9. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。
10. 在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，留沉淀。
11. 沉淀中加入100-200 μl蛋白提取液C，充分混匀。
12. 在4℃条件下振荡20-30分钟。
13. 即得到内质网蛋白样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
1. 提取液制备：
每200 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
3. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 加入500μl冷的试剂 A，置冰上10分钟。
5. 用Dounce匀浆器匀浆充分匀浆。
6. 匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，取上清。
7. 将上清在4℃，11000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，取上清。
8. 将上清在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，留沉淀。
9. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。
10. 在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，留沉淀。
11. 沉淀中加入100-200 μl蛋白提取液C，充分混匀。
12. 在4℃条件下振荡20-30分钟。
13. 即得到内质网蛋白样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
组织内质网蛋白提取：
1. 提取液制备：
每200 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
3. 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
4. 加入500μl冷的试剂 A，置冰上10分钟。
5. 用Dounce匀浆器充分匀浆30-40下，至无明显固体团块。
6. 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，取上清。
7. 将上清在4℃，11000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，取上清。
8. 将上清在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，留沉淀。
9. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。
10. 在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，留沉淀。
11. 沉淀中加入100-200 μl蛋白提取液C，充分混匀。
12. 在4℃条件下振荡20-30分钟。
13. 即得到内质网蛋白样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂C中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂C中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
参考文献
1.Xiao Jiang,Xiao-hui Liao,Li-li Huang, et al.
Overexpression of augmenter of liver regeneration (ALR) mitigates the effect of H2O2-induced endoplasmic reticulum stress in renal tubule epithelial cells
Apoptosis 2019 （IF=3.967）
2.Ming Li et al.
Network Pharmacology-Based Prediction and Verification of Qingluo Tongbi Formula to Reduce Liver Toxicity of Tripterygium wilfordii via UGT2B7 in Endoplasmic Reticulum
Med Sci Monit 2020
Overexpression of augmenter of liver regeneration (ALR) mitigates the effect of H2O2-induced endoplasmic reticulum stress in renal tubule epithelial cells
Apoptosis 2019 （IF=3.967）
2.Ming Li et al.
Network Pharmacology-Based Prediction and Verification of Qingluo Tongbi Formula to Reduce Liver Toxicity of Tripterygium wilfordii via UGT2B7 in Endoplasmic Reticulum
Med Sci Monit 2020
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