浆蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用)

BB-319904
选择规格
  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥900元
  • ¥1600元
数量
产品概述 product description

贝博® BBproExtra® 胞浆蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种原代或传代动物细胞和各种动物实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取胞浆蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。制备的胞浆蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。 本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份,不含SDS、Triton X-100、chaps等可能影响质谱实验的组份,最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响,基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。 本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF,可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移,因此使用本产品提取的蛋白样品可以用于质谱(Mass Spectrometry, MS)检测和分析,蛋白质组学(proteomics)等相关研究。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒提取的蛋白也可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 贝博® BBproExtra® 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。 2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。 3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
质谱分析
适用样本
动物细胞/组织
产品特点
 使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。 蛋白提取液含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白、胞浆蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
质谱分析
仪器准备
1.离心机2.振荡器3.匀浆机/匀浆器4.涡旋混匀器5.移液器6.冰箱7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 2.蛋白定量
耗材准备
1.离心管2.吸头3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。 2.实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。 4.如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。 5.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。6.Western实验内参可以选用Lamin B、TBP、Histon H3。
使用方法
1. 提取液制备:将试剂B1和试剂B2混合,配成蛋白提取液B,充分混匀备用。每500 μl蛋白提取液B中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。【注】: 蛋白提取液B短期置4℃保存,长期不用的可以分装后-20℃保存,避免反复冻融。 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制剂可以一次加入。 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。 以下步骤中使用的蛋白提取液B为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。2. 取5×106 -1×107个细胞(大约50 mg细胞/50 μl细胞),在4℃,500×g力条件下离心5分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。【注】: 组织样本用剪刀剪碎,加冷PBS,用组织匀浆器/机匀浆至无明显肉眼可见固体。匀浆液在4℃,1000×g力条件下离心10分钟,弃上清,收集沉淀。3. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。4. 大约每20 μl细胞(离心后细胞沉淀体积)中加入200-300 μl冷的提取液 A,高速涡旋振荡混匀或吹打混匀,置2-8℃条件振荡15-30分钟。【注】: 提取液A处理后细胞体积应减少,否则延长提取液A振荡处理时间。 使用振荡器/摇床的较低转速,提取液能轻微晃动即可。 没有振荡条件也可以不振荡,稍微延长提取液的处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。5. 然后在4℃,2000×g条件下离心10分钟。收集上清,弃沉淀。6. 在上清中加入100-200 μl冷的提取液B,高速涡旋振荡15秒。7. 置2-8℃条件振荡10-15分钟。【注】: 使用振荡器/摇床的较低转速,提取液能轻微晃动即可。 没有振荡条件也可以不振荡,稍微延长提取液的处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。8. 在4℃,12000×g条件下离心10分钟。9. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞浆蛋白。10. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。【注】: 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品:BB-3401。 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。11. 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。【注】: 蛋白样品中含有盐,需要脱盐处理后用于双向电泳。 经透析或脱盐处理的蛋白样品不含有去垢剂和高浓度盐。
常见问题分析
1.胞浆蛋白浓度低? 胞浆蛋白丰度较低,需要足够细胞数量提取,在条件允许的情况下,尽可能加大细胞量。 2.用什么方法定量蛋白? 建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。 3.提取的蛋白具有活性吗? 本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
参考文献
1.Pingli Li et al.Preparation and in vitro immunomodulatory effect of curdlan sulfateCarbohydrate Polymers 2014 (IF=7.182)2. Guang Yu et al. Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic detention of I2PP2A/SET in Alzheimer diseaseNeurobiology of Aging 2013 (IF=6.189) 3.Wan Li et al. Anti-inflammatory effects of Morchella esculenta polysaccharide and its derivatives in fine particulate matter-treated NR8383 cellsInternational Journal of Biological Macromolecules 2019 (IF=5.162) 4.Mengjuan Wu et al. Phosphorylation of SET mediates apoptosis via P53 hyperactivation and NM23-H1 nuclear importNeurobiology of Aging 2018 (IF=5.117)5. Xiaoling Ma et al. Staphylococcal Panton-Valentine Leukocidin Induces Pro-Inflammatory Cytokine Production and Nuclear Factor-Kappa B Activation in NeutrophilsPloS one 2012 (IF=4.411) Jinchun Qian et al. Ophiopogonin D prevents H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cellsJournal of Ethnopharmacology 2010 (IF=3.69)