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产品概述
product description
线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的，本试剂盒用简便快速的方法即可在40分钟内提取得到线粒体。 贝博® BBproExtra® 线粒体提取试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的线粒体提取。最好用于新鲜样品的线粒体提取，由于冷冻样品的线粒体在冻存过程中可能被破坏，提取回收率可能大幅降低。 本试剂盒提取的线粒体可以用于各种线粒体功能研究、蛋白提取等下游应用。 除了线粒体提取试剂盒，贝博® 还提供细胞核、溶酶体、高尔基体等各种亚细胞结构的提取试剂盒以及相应的染色试剂盒和蛋白质提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.长期不用可以-20℃保存。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
动物细胞/组织
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.最好使用标准Dounce匀浆器匀浆，如果没有标准Dounce匀浆器，用普通1ml玻璃匀浆器匀浆也可，但是线粒体回收率会下降。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.最好使用标准Dounce匀浆器匀浆，如果没有标准Dounce匀浆器，用普通1ml玻璃匀浆器匀浆也可，但是线粒体回收率会下降。
使用方法
细胞线粒体提取：
1. 取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
2. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 细胞沉淀中加入500μl-1ml冷的试剂 A重悬，置冰上5分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。
6. 将上清在4℃，1000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，11000×g力条件下离心15分钟。弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B，轻轻混匀。
9. 在4℃，11000×g力条件下离心15分钟。
10. 弃上清，沉淀用线粒体保存液重悬。
11. 即得到线粒体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
组织线粒体提取：
1. 取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
2. 用手术剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
3. 沉淀中加入500μl-1ml冷的试剂 A混匀，置冰上5分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。
6. 将上清在4℃，1000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，11000×g力条件下离心15分钟。弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B，轻轻混匀。
9. 在4℃，11000×g力条件下离心15分钟。
10. 弃上清，沉淀用线粒体保存液重悬。
11. 即得到线粒体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
1. 取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
2. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 细胞沉淀中加入500μl-1ml冷的试剂 A重悬，置冰上5分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。
6. 将上清在4℃，1000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，11000×g力条件下离心15分钟。弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B，轻轻混匀。
9. 在4℃，11000×g力条件下离心15分钟。
10. 弃上清，沉淀用线粒体保存液重悬。
11. 即得到线粒体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
组织线粒体提取：
1. 取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
2. 用手术剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
3. 沉淀中加入500μl-1ml冷的试剂 A混匀，置冰上5分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。
6. 将上清在4℃，1000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，11000×g力条件下离心15分钟。弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B，轻轻混匀。
9. 在4℃，11000×g力条件下离心15分钟。
10. 弃上清，沉淀用线粒体保存液重悬。
11. 即得到线粒体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
参考文献
1.Lian Duan, et al.
Lycopene restores the effect of ischemic postconditioning on myocardial ischemia‑reperfusion injury in hypercholesterolemic rats
International Journal of Molecular Medicine 2019
2.Shuang Liu, Nan Wu et al.
Protective effect of morin on myocardial ischemia‑reperfusion injury in rats
International Journal of Molecular Medicine 2018
Lycopene restores the effect of ischemic postconditioning on myocardial ischemia‑reperfusion injury in hypercholesterolemic rats
International Journal of Molecular Medicine 2019
2.Shuang Liu, Nan Wu et al.
Protective effect of morin on myocardial ischemia‑reperfusion injury in rats
International Journal of Molecular Medicine 2018
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