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产品概述
product description
内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。 贝博® BBproExtra® 内质网提取试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的内质网的提取。 本试剂盒适用于各种粗面内质网和光面内质网的提取。 本试剂盒可以用于完整内质网提取相关的实验 本试剂盒需要使用高速离心，没有高速离心的条件时，可以选择贝博的低速离心法内质网提取试剂盒（相关产品BB-36051）。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.提取液长期不用时置于-20℃保存，15天内要多次使用的话置4℃保存即可。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
动物细胞/组织
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通1ml玻璃匀浆器匀浆也可，但是内质网回收率可能会下降。
4.要求离心力50000×g的离心，没有条件的话可以采用30000×g -50000×g离心力，最好能达到45000×g左右。最小离心力需要保证30000×g。
5.如果需要回收所有光面内质网小泡，最后一个离心步骤的离心力需要提高到100000×g力。
6.离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通1ml玻璃匀浆器匀浆也可，但是内质网回收率可能会下降。
4.要求离心力50000×g的离心，没有条件的话可以采用30000×g -50000×g离心力，最好能达到45000×g左右。最小离心力需要保证30000×g。
5.如果需要回收所有光面内质网小泡，最后一个离心步骤的离心力需要提高到100000×g力。
6.离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
使用方法
细胞内质网提取：
1. 取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
2. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 加入500 μl-1 ml冷的试剂 A，置冰上10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下。
5. 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6. 将上清在4℃，11000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入400 μl冷的试剂B，混匀。
9. 在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。
10. 弃上清，沉淀用内质网保存液重悬。
11. 即得到内质网样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
组织内质网提取：
1. 取50 mg -100 mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
2. 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
3. 加入500 μl-1 ml冷的试剂 A，置冰上10分钟。
4. 用Dounce匀浆器充分匀浆30-40下，至无明显固体团块。然后在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6. 在4℃，11000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入400 μl冷的试剂B，混匀。
9. 在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。
10. 弃上清，沉淀用内质网保存液重悬。
11. 即得到内质网样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
1. 取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
2. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 加入500 μl-1 ml冷的试剂 A，置冰上10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下。
5. 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6. 将上清在4℃，11000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入400 μl冷的试剂B，混匀。
9. 在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。
10. 弃上清，沉淀用内质网保存液重悬。
11. 即得到内质网样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
组织内质网提取：
1. 取50 mg -100 mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
2. 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
3. 加入500 μl-1 ml冷的试剂 A，置冰上10分钟。
4. 用Dounce匀浆器充分匀浆30-40下，至无明显固体团块。然后在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6. 在4℃，11000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入400 μl冷的试剂B，混匀。
9. 在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。
10. 弃上清，沉淀用内质网保存液重悬。
11. 即得到内质网样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
参考文献
1.Xiao Jiang, et al.
Overexpression of augmenter of liver regeneration (ALR) mitigates the effect of H2O2-induced endoplasmic reticulum stress in renal tubule epithelial cells
Apoptosis 2019
2.Ming Li, et al.
Network Pharmacology-Based Prediction and Verification of Qingluo Tongbi Formula to Reduce Liver Toxicity of Tripterygium wilfordii via UGT2B7 in Endoplasmic Reticulum
Med Sci Monit 2020
Overexpression of augmenter of liver regeneration (ALR) mitigates the effect of H2O2-induced endoplasmic reticulum stress in renal tubule epithelial cells
Apoptosis 2019
2.Ming Li, et al.
Network Pharmacology-Based Prediction and Verification of Qingluo Tongbi Formula to Reduce Liver Toxicity of Tripterygium wilfordii via UGT2B7 in Endoplasmic Reticulum
Med Sci Monit 2020
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