核糖体提取试剂盒

BB-3606
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产品概述 product description

核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoprotein particle),主要由RNA和蛋白质构成,其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链,所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。核糖体无膜结构，主要由蛋白质（40%）和RNA（60%）构成.核糖体按沉降系数分为两类,一类（70S）存在于细菌等原核生物中,另一类（80S）存在于真核细胞的细胞质中。他们有的漂浮在细胞内，有的结集在一起。 贝博® BBproExtra® 核糖体提取试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的核糖体的提取。 用于提需要细菌、植物、叶绿体核糖体提取试剂盒可以联系贝博选择其他货号的产品。 本试剂盒的核糖体提取对实验室离心机设备要求较高，对实验的操作细致程度要求较高。如果实验室没有能达到100000×g以上的离心力的设备，可以选用贝博低速离心法的核糖体提取试剂盒（相关产品：BB-36061）。 贝博® BBproExtra® 核糖体提取试剂盒（低速离心法）只需要达到20000×g以内的离心力即可提取核糖体，一般的常规台式离心机均可以满足使用要求。低速离心法的提取试剂盒得到的核糖体纯度会低于高速离心法。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.长期不用可以-20℃保存。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
动物细胞/组织
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.实验中所有液体以及器具均应该用DEPC处理。用0.1%的DEPC处理12小时然后高压。
4.下游用于蛋白质类实验的话可以不用DEPC处理。
5.细胞最好采用新鲜收集的，或者收集后立即置于-80℃保存的样本。
6.最好使用标准Dounce匀浆器匀浆，如果没有标准Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是核糖体回收率可能会下降。
使用方法

细胞核糖体提取：
1. 取1-2×107个细胞，在4℃，500-1000×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
2. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 加入500μl-1ml冷的试剂 A，置冰上10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆20-30下。
5. 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6. 将上清在4℃，20000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，100000×g -120000×g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。
9. 在4℃，100000×g -120000×g力条件下离心60分钟。
10. 弃上清，沉淀用核糖体保存液重悬。
11. 即得到核糖体样品，置冰箱-80℃冻存备用或直接用于下游实验。

组织核糖体提取：
1. 取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
2. 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
3. 加入500μl-1ml冷的试剂 A，置冰上10分钟。
4. 用Dounce匀浆器充分匀浆20-30下，至无明显固体团块。然后在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6. 在4℃，20000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，100000×g -120000×g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。
9. 在4℃，100000×g -120000×g力条件下离心60分钟。
10. 弃上清，沉淀用核糖体保存液重悬。
11. 即得到核糖体样品，置冰箱-80℃冻存备用或直接用于下游实验。

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