酵母线粒体提取试剂盒

BB-3631
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产品概述 product description

线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。 贝博® BBproExtra® 酵母线粒体提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母样品中提取线粒体。提取过程简单方便。 本试剂盒不能用于冷冻样品的线粒体提取。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.酵母洗涤液长期不用时-20℃保存。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
酵母
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
使用方法
1. 酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
2. 用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 每100ul体积或100mg湿重酵母沉淀物中加入400ul酵母线粒体提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。
4. 在1000×g条件下离心5-10分钟，收集酵母沉淀。
5. 用300ul酵母洗涤液D洗涤酵母一次，离心收集酵母。
6. 酵母沉淀物中加入500ul酵母线粒体提取液B，充分混匀后。
7. 在37℃或室温条件下轻微振荡60-90分钟。
8. 在2000×g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集沉淀。
9. 沉淀用300ul酵母洗涤液D洗涤两次。离心收集沉淀。
10. 在沉淀中加入400μl酵母线粒体提取液 C，充分混匀，然后在振荡器上振荡10-30分钟。
11. 在4℃，500×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
12. 将上清吸入另一干净离心管。
13. 在4℃，12000×g条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
14. 在沉淀中加入400μl线粒体保存液E，混匀。
15. 在4℃，12000×g条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。即得到酵母线粒体样品。
16. 根据下游实验需要，将沉淀用相应的缓冲溶液重悬。置冰箱备用或直接用于下游实验。

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