酵母内质网提取试剂盒

BB-36314
选择规格
  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥800元
  • ¥1500元
数量
产品概述 product description

内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统,膜片间的隙状空间称为池,通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路,另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关,并且还具有运输蛋白质的功能。 贝博® BBproExtra® 酵母内质网提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种酵母样品中提取内质网。提取过程简单方便。 本试剂盒不能用于冷冻样品的内质网提取。 本试剂盒可以用于完整内质网提取相关的实验,也可以用于下游内质网蛋白提取等实验。 本试剂盒需要使用高速离心,没有高速离心的条件时,可以选择贝博的低速离心法内质网提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.酵母洗涤液长期不用时-20℃保存。 2.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
酵母
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机2.振荡器3.Dounce匀浆器4.涡旋混匀器5.移液器6.冰箱7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
耗材准备
1.离心管2.吸头3.一次性手套
使用注意事项
 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 要求离心力50000×g的离心,没有条件的话可以采用30000×g -50000×g离心力,最好能达到45000×g左右。最小离心力需要保证30000×g。 如果需要回收所有光面内质网小泡,最后一个离心步骤的离心力需要提高到100000×g力。 离心机转速有相对离心力(RCF,×g)和每分钟转速(RPM)两种表示方式,有些离心机设置有RPM和×g显示切换,但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算:g=r×1.118×10-5×rpm2 (r 为有效离心半径,即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度,单位为厘米) 例如: 转速为3000 rpm,有效离心半径为10 cm,则相对离心力(RCF,×g)为=10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。
使用方法
1. 酵母培养物,在4℃,1000×g条件下离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集酵母沉淀。2. 用PBS洗涤酵母两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。3. 每100 μl体积或100 mg湿重酵母沉淀物中加入400 μl酵母内质网提取液A,混匀后,在30℃条件下保温15分钟。4. 在1000×g条件下离心5-10分钟,收集酵母沉淀。5. 用300 μl酵母洗涤液D洗涤酵母一次,离心收集酵母。6. 酵母沉淀物中加入500 μl酵母内质网提取液B,充分混匀后。7. 在37℃或室温条件下轻微振荡60-90分钟。8. 在2000×g条件下离心5-10分钟,弃上清,收集沉淀。9. 沉淀用300 μl酵母洗涤液D洗涤两次。离心收集沉淀。10. 在沉淀中加入400 μl酵母内质网提取液 C,充分混匀,然后在振荡器上振荡10-30分钟。11. 在4℃,500×g条件下离心5分钟,弃沉淀,收集上清。12. 将上清吸入另一干净离心管。13. 在4℃,11000×g条件下离心20分钟。弃沉淀,收集上清。14. 将上清在4℃,50000×g力条件下离心45分钟。弃上清,收集沉淀。15. 在沉淀中加入200-400 μl内质网保存液E,混匀。【注】: 也可不用试剂盒中的内质网保存液重悬,根据下游实验需要选择合适的缓冲液重悬内质网或直接用于下游实验。 需要提取内质网蛋白时可以直接在沉淀中加入适量蛋白裂解液进行裂解。16. 在4℃,50000×g条件下离心20分钟。弃上清,收集沉淀。即得到酵母内质网样品。17. 根据下游实验需要,将沉淀用相应的缓冲溶液重悬。置冰箱备用或直接用于下游实验。

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