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核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoprotein particle)，主要由RNA和蛋白质构成,其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链，所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。核糖体无膜结构，主要由蛋白质（40%）和RNA（60%）构成.核糖体按沉降系数分为两类，一类（70S）存在于细菌等原核生物中，另一类（80S）存在于真核细胞的细胞质中。他们有的漂浮在细胞内，有的结集在一起。 贝博® BBproExtra® 酵母核糖体提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母样品中提取总核糖体。提取过程简单方便。 本试剂盒不能用于冷冻样品的核糖体提取。 本试剂盒需要使用超速离心。如果没有超速离心的条件，可以选择贝博其它货号的试剂盒，采用低速离心提取核糖体（相关产品：BB-363152）。使用超速离心的试剂盒的核糖体纯度高于低速离心的试剂盒，低速离心的试剂盒产品提取时间较长，需要过夜处理。请根据试剂需要选择。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。可以提供针对不同下游实验应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。 贝博® BBproExtra® 还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。
2.酵母洗涤液D长期不用时-20℃保存。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.吸头
3.一次性手套
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.如果是做核酸类下游应用，实验中所有液体以及器具均应该用DEPC处理。用0.1%的DEPC处理12小时然后高压。
4.下游用于蛋白质类实验的话可以不用DEPC处理。
5.细胞最好采用新鲜收集的，或者收集后立即置于-80℃保存的样本。
6.最好使用标准Dounce匀浆器匀浆，如果没有标准Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是核糖体回收率可能会下降。
2. 用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 每100ul体积或100mg湿重酵母沉淀物中加入400ul酵母核糖体提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。
4. 在1000g条件下离心5-10分钟，收集酵母沉淀。
5. 用300ul酵母洗涤液D重悬细胞，静置10分钟，离心收集酵母。
6. 酵母沉淀物中加入500ul酵母核糖体提取液B，充分混匀。
7. 在37℃或室温条件下轻微振荡60-90分钟。
8. 在2000g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集沉淀。
9. 沉淀用300ul酵母洗涤液D洗涤两次。离心收集沉淀。
10. 在沉淀中加入400μl酵母核糖体提取液 C，充分混匀，用Dounce匀浆器匀浆20-30下。
11. 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
12. 将上清在4℃，20000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
13. 将上清在4℃，100000×g -120000×g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
14. 弃上清，沉淀即为核糖体。
15. 沉淀用核糖体保存液或其他相应的缓冲液重悬。即得到酵母核糖体样品。
16. 置冰箱备用或直接用于下游实验。
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