酵母核糖体提取试剂盒(低速离心法)

BB-363152
选择规格
  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥1100元
  • ¥1700元
数量
产品概述 product description

核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoprotein particle),主要由RNA和蛋白质构成,其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链,所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。核糖体无膜结构,主要由蛋白质(40%)和RNA(60%)构成.核糖体按沉降系数分为两类,一类(70S)存在于细菌等原核生物中,另一类(80S)存在于真核细胞的细胞质中。他们有的漂浮在细胞内,有的结集在一起。 贝博® BBproExtra® 酵母核糖体提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种酵母样品中提取总核糖体。提取过程简单方便。 本试剂盒不能用于冷冻样品的核糖体提取。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.酵母核糖体提取液B长期不用时-20℃保存。避免反复冻融。 2.酵母洗涤液D长期不用时-20℃保存。 3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
酵母
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机2.振荡器3.Dounce匀浆器4.涡旋混匀器5.移液器6.冰箱7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
耗材准备
1.离心管2.吸头3.一次性手套
使用注意事项
 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 如果是做核酸类下游应用,实验中所有液体以及器具均应该用DEPC处理。用0.1%的DEPC处理12小时然后高压。 下游用于蛋白质类实验的话可以不用DEPC处理。 细胞最好采用新鲜收集的,或者收集后立即置于-80℃保存的样本。 最好使用标准Dounce匀浆器匀浆,如果没有标准Dounce匀浆器,用普通玻璃匀浆器匀浆也可,但是核糖体回收率可能会下降。
使用方法
1. 酵母培养物,在4℃,1000g条件下离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集酵母沉淀。2. 用PBS洗涤酵母两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。3. 每100ul体积或100mg湿重酵母沉淀物中加入400ul酵母核糖体提取液A,混匀后,在30℃条件下保温15分钟。4. 在1000g条件下离心5-10分钟,收集酵母沉淀。5. 用300ul酵母洗涤液D重悬细胞,静置10分钟,离心收集酵母。6. 酵母沉淀物中加入500ul酵母核糖体提取液B,充分混匀。7. 在37℃或室温条件下轻微振荡60-90分钟。8. 在2000g条件下离心5-10分钟,弃上清,收集沉淀。9. 沉淀用300ul酵母洗涤液D洗涤两次。离心收集沉淀。10. 在沉淀中加入400μl酵母核糖体提取液 C,充分混匀,用Dounce匀浆器匀浆20-30下。11. 将匀浆液在4℃,1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀,收集上清。12. 将上清在4℃,3000×g力条件下离心10分钟,弃沉淀,收集上清。13. 将上清在4℃,12000×g -20000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀,收集上清。。14. 在上清中加入100ul试剂E,充分混匀。15. 置2-8℃冰箱静置过夜。16. 在4℃条件下,10000×g离心20-45分钟。17. 小心移除上清,收集沉淀。18. 沉淀用适量核糖体保存液或其他相应的缓冲液重悬。即得到酵母核糖体样品。【注】: 也可不用试剂盒中的核糖体保存液重悬,根据实验需要选择合适的缓冲液重悬核糖体或直接用于下游实验。19. 置冰箱备用或直接用于下游实验。

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