细菌核糖体提取试剂盒

BB-3651
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产品概述 product description

核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoprotein particle),主要由RNA和蛋白质构成,其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链,所以 核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。核糖体无膜结构，主要由蛋白质（40%）和RNA（60%）构成.核糖体按沉降系数分为两类,一类（70S）存在于细菌等原核生物中,另一类（80S）存在于真核细胞的细胞质中。他们有的漂浮在细胞内，有的结集在一起。 贝博® BBproExtra® 细菌核糖体提取试剂盒可用于各种原核细菌样本的核糖体的提取。 需要用于动物细胞、植物、叶绿体核糖体提取试剂盒可以联系贝博选择其他货号的产品。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
细菌
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.高压细胞破碎仪/超声细胞破碎仪
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.实验中所有液体以及器具均应该用DEPC处理。用0.1%的DEPC处理12小时然后高压。
4.下游用于蛋白质类实验的话可以不用DEPC处理。
5. 细菌核糖体提取的关键是待提取的细胞的质量。一般来说，最好采用Rnase活性缺失的大肠杆菌样本。
6. 细胞最好采用新鲜收集的，或者收集后立即置于-80℃保存的样本。
7.细胞通常培养至接近或达到对数生长期。
使用方法
1. 收集对数生长期细菌细胞，离心后尽可能吸干培养基。
2. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 每500mg湿重菌体中加入1ml冷的试剂 A和10ul冷的试剂 B，充分混匀，置冰上30分钟。
4. 用高压细胞破碎仪或超声细胞破碎仪破碎细胞。
5. 在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6. 将上清在4℃，20000×g力条件下离心30分钟，弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，170000×g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入400μl冷的试剂C，混匀。
9. 在4℃，170000×g力条件下离心60分钟。
10. 弃上清，沉淀用核糖体保存液D重悬。
11. 即得到核糖体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

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