内体提取试剂盒（细胞）-低速离心法

BB-36712
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产品概述 product description


细胞内体是真核细胞内的一种膜包裹的细胞器，它在细胞的物质转运、信号传导以及病原体感染等多个生物学过程中发挥着关键作用。
成熟的内体直径大约500 nm左右，通常分为早期胞内体（Early Endosome），晚期胞内体（Late Endosome）和循环胞内体（Recycling Endosome）。主要特征是酸性的、不含溶酶体酶的小囊泡。
贝博® BBproExtra® 内体提取试剂盒可用于各种动物细胞样本的内体的提取分离。
传统的内体提取方法需要采用较高的离心力或者采用密度梯度离心，对实验室离心机设备要求较高，对实验的操作细致程度要求较高。如果实验室没有能达到100000×g以上的离心力的设备，则没法进行提取。贝博® BBproExtra® 内体提取试剂盒（低速离心法）只需要达到20000×g以内的离心力即可提取内体，一般的常规台式离心机均可以满足使用要求。
低速离心法的内体提取试剂盒的纯度低于高速离心法的，有高速离心条件的实验室建议使用高速离心试剂盒（相关产品：BB-3671）。
贝博® BBproExtra® 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。
贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。
贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1. 长期不用可以-20℃保存。
2. 试剂拆封后请尽快使用完
有效期
一年
适用样本
细胞
仪器准备
1. 离心机
2. 振荡器
3. 匀浆机/匀浆器
4. 涡旋混匀器
5. 移液器
6. 冰箱
7. 冰盒
试剂准备
1. PBS缓冲液
耗材准备
2. 离心管
3. 吸头
4. 一次性手套
使用注意事项
1. 预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
3. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4. 实验中所有液体以及器具均应该用DEPC处理。用0.1%的DEPC处理12小时然后高压。
5. 下游用于蛋白质类实验的话可以不用DEPC处理。
6. 细胞最好采用新鲜收集的，或者收集后立即置于-80℃保存的样本。
使用方法
1. 取1-2×107个细胞，在4℃，500-1000×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 细胞沉淀中加入500 μl-1 ml冷的试剂 A，置冰上10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆20-30下。
5. 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6. 将上清在4℃，6000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，10000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
8. 将上清在4℃，20000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
9. 在上清中加入250 μl试剂B，充分混匀。
10. 置2-8℃冰箱静置过夜。
11. 在4℃条件下，10000×g离心20-45分钟。
12. 小心移除上清，收集沉淀。
13. 沉淀用适量保存缓冲液重悬。
14. 即得到内体样品，置冰箱-80℃冻存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1 如何鉴定胞内体？
可以用Western blot方法检测内体Marker（如Rab5、Rab7等早期/晚期内体Marker）或电镜形态观察。
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