细胞内囊泡提取试剂盒-超纯

BB-36912
选择规格
  • 20T
  • 50T
价格
  • ¥1700元
  • ¥2500元
数量
产品概述 product description

贝博® 细胞内囊泡(Vesicles)提取试剂盒(超纯)适用于从各种原代或传代培养细胞样品中提取高纯度总囊泡。不需要超速离心,仅需通过简单的常规离心即可从样本中获取大量结构完整的囊泡,具有快速简单,提取效率高的特点,可节省更多的实验时间和样本。提取的囊泡可根据实验目的用于后续的多种实验,应用范围广泛。 本试剂盒可以提取所有直径为10 nm - 3000 nm的囊泡结构。 贝博® 生物自主开发的囊泡快速提取试剂盒系列产品,可以通过简单离心快速高效获得高纯度囊泡颗粒。本试剂盒提取的囊泡完好无缺,能用于各种功能研究、蛋白分析及RNA分析、电镜分析、NTA粒径分析等下游实验应用。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用,则让液体保留在滤膜上,直到使用。
2.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
动物细胞
产品特点
1.使用方便,无需超速离心,省时省力;
2.纯度高,富集量大,应用范围广;
3.获取的囊泡结构和功能完整;
4.稳定性好,便于运输,便于保存。
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 (pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X)) (phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS:约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.不同细胞的囊泡数量差异极大,请根据实际情况选择样品的量,根据下游应用和参考文献确定。条件允许的情况下采用尽可能多的细胞。
2.在收获细胞时,应确定死亡细胞不超过5%。细胞凋亡/死亡过程中会释放大量大小不等的囊泡,它们在囊泡的提取过程中会污染活细胞产生的囊泡。
3.已经分离好的囊泡样本如果需要进行电镜观察,只能冰上或4℃保存,存放时间不超过两天,注意不可冷冻保存,否则可能会影响电镜观察效果。
使用方法

囊泡提取:
1. 取5-10×106个细胞,在4℃,500×g力条件下离心5分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 细胞沉淀中加入1ml试剂D,充分混匀(每20μl体积细胞沉淀(约20mg,2×106个细胞)中加入200-300μl冷的提取液 D),高速涡旋振荡混匀或吹打混匀,置2-8℃条件振荡10-30分钟。
4. 然后在4℃,2000×g条件下离心5分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6. 在1ml上清中加入0.25ml提取液A,盖紧离心管盖,上下颠倒混匀1分钟左右,使液体充分混匀。
7. 置2-8℃冰箱静置过夜。
8. 在4℃条件下,10000×g离心60分钟。
9. 小心移除上清,收集沉淀。
10. 取500μl囊泡保存液将沉淀重悬,用移液器轻轻吹打混匀,得到囊泡沉淀重悬液,进行下列囊泡纯化步骤操作。

清洗囊泡纯化离心管:
1. 用缓冲液或纯水进行预清洗。
2. 离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用,则让液体保留在滤膜上,直到使用。

囊泡纯化:
1. 将囊泡纯化离心管内管插入所提供的一个微量离心管中。
2. 向内管中加入过500 μl的囊泡沉淀重悬液样本,并盖上盖子。
3. 将盖好盖子的囊泡纯化离心管放入离心转子中,让盖子的连接带朝着转子的中央;用一个类似的离心管平衡。
4. 以5000-8000 ×g离心约10-15分钟。离心至大约剩余50μl-100μl液体。
5. 离心结束后将整个离心管从离心机中取出,取出内管。
6. 为了回收纯化后的囊泡,将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中,让打开的盖子朝着转子的中央;用一个类似的离心管进行平衡。
7. 以1000 x g离心2分钟,使纯化后的囊泡样本从纯化内管转移到收集管中。
8. 吸取收集管中的液体,即得到囊泡样品纯品。
9. 用纯水或缓冲液洗涤内管和收集管,继续纯化下一个样品。

囊泡纯化离心管清洗和保存:
1. 使用后用水冲洗干净;
2. 内管加入超纯水500µl,5000×g离心5分钟;
3. 吸净内管中的水,加入500µl 0.1M NaOH,5000g离心20分钟;
4. 用0.1M NaOH 浸泡24小时;
5. 用水冲洗干净;
6. 用无菌水浸泡2-8℃保存。
7. 外管用自来水洗净后,用超纯水冲洗干净,晾干。
常见问题分析
1.蛋白浓度低?
很多细胞囊泡量不够下游应用,在条件允许的情况请尽可能加大培养上清的上样量。
处理部分样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。请选择高质量的蛋白裂解液或蛋白提取试剂盒。

2.抽提得到的RNA浓度低?
很多细胞囊泡量不够下游应用,在条件允许的情况请尽可能加大培养上清的上样量。
 囊泡纯化管内管膜会因为离心时间过长而变干么?
不会,因为内管有死体积,总会有溶液残留在内管中。死体积大约10-20μl。

3.可以重复使用过滤管么?
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当,可以反复使用多次。但是超过8次重复使用后过滤膜有破损风险,注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。

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