组织外泌体提取试剂盒（Exosomes）（通用）

BB-39047
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产品概述 product description

贝博® BBexosomeOUT® 组织外泌体（Exosomes）提取试剂盒适用于从各种各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织样品中提取外泌体。不需要超速离心，仅需通过简单的常规离心即可从样本中获取大量结构完整的外泌体，具有快速简单，提取效率高的特点，可节省更多的实验时间和样本。提取的外泌体可根据实验目的用于后续的多种实验，应用范围广泛。 外泌体是活细胞分泌的来源于晚期核内体(也称为多囊泡体 )的膜性小囊泡，直径约为30-150nm，天然存在于血液、唾液、尿液和母乳等各种体液中，研究发现，Exosome内含有与细胞来源相关的蛋白质、mRNA和microRNA，并且exosome能够通过生物屏障，在细胞间传递功能性核酸分子，从而发挥各种生物学功能。 外泌体囊泡已经成为细胞间通讯的重要介质，参与原核生物和高等真核生物细胞之间的生物信号传递，以调节不同范围的生物过程。外泌体囊泡的病理生理作用开始在包括癌症、感染性疾病和神经变性疾病在内的疾病中得到充分认识，显现了外泌体作为疾病的早期诊断、治疗干预的潜在新靶点的巨大应用前景。此外，未修饰和工程化的外泌体囊泡可能在大分子药物递送中具有应用价值。 传统的从液体中分离和提取exosome的主要方法是超速离心法，这种方法缺点是耗时耗力，往往需要30-70个小时，每次最多只能处理6个样品，需要大量的起始材料，而且产量不高。 贝博® 生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒系列产品，可以通过简单离心快速高效获得高纯度外泌体颗粒。本试剂盒提取的外泌体完好无缺，能用于各种功能研究、蛋白分析及RNA分析等下游应用实验。 本试剂盒按每个样本处理200 mg组织样本计，每个20 T试剂盒大约可以用于提取4 g组织样本。如果需要处理大量的组织样本，将提取液按说明书标准操作的体积等比例调整即可。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞、组织染色，免疫组织化学，细胞培养等相关试剂盒产品。 贝博® BBproExtra® 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
 试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
适用样本
组织
产品特点
1.使用方便，无需超速离心，省时省力；
2.纯度高，富集量大，应用范围广；
3.获取的Exosome结构和功能完整；
4.稳定性好，便于运输，便于保存。
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机 2.移液器 3.冰箱 4.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 2.纯水
耗材准备
1.离心管2.吸头3.一次性手套
使用注意事项
 以下以以下以200 mg组织为例，实际操作时按样本和提取液用量体积比等比例调整使用即可。 不同样本外泌体数量差异极大，请根据实际情况选择样本的量，根据下游应用和参考文献确定。条件允许的情况下采用尽可能多的样本。 已经分离好的外泌体样本如果需要进行电镜观察，只能冰上或4℃保存，存放时间不超过两天，注意不可冷冻保存，否则可能会影响电镜观察效果。
使用方法
样本处理： 1. 提前将试剂A置于4℃或冰上融化并混匀。 2. 将200 mg组织在消毒器皿（置于冰上）中用手术剪刀或刀片剪切成1 mm3～3 mm3左右的碎组织块。 3. 将组织碎块转移至离心管中，加入2 ml PBS缓冲液，混匀后300×g离心15 min，弃上清，留沉淀。 4. 按照每100 mg组织块加入1 mL 试剂A的比例，将组织块与试剂A混匀在2 mL离心管中，于37℃恒温振荡器/摇床上振荡孵育30 min。 5. 反应液以8000×g离心15 min，将上清转移至新的离心管中。 6. 将离心上清液于4℃以12,000×g离心15 min。 7. 将上清液转移到新离心管中。 外泌体提取： 1. 在上一步收集的2 ml离心上清样品中加入0.5 ml试剂B，盖紧离心管盖，上下颠倒混匀1分钟左右，使液体充分混匀。 2. 置2-8℃冰箱静置过夜。 3. 在4℃条件下，12000×g离心30-60分钟。 4. 小心移除上清，收集沉淀。 5. 将含有沉淀的离心管再次在4℃条件下，12000×g离心60-120分钟。弃上清，留沉淀。 6. 取200-400 ul PBS均匀吹打离心沉淀物，待其充分溶解后，将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中。 外泌体纯化： 1. 将上一步收获的外泌体颗粒悬液转入外泌体纯化离心管的内管中。 2. 在4℃，3000g条件下离心10分钟。 3. 收集套管内液体即得到外泌体悬液纯品。 4. 将上述外泌体分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.准备做植物外泌体研究，初始样品量需要准备多少？
不同样本外泌体含量差异较大，根据文献选择起始样本量。有条件的情况下尽可能使用多一点样本量。

2.如何鉴定提取的外泌体？
通常使用透射电镜检测（形态）、粒径检测（大小）、外泌体标志蛋白Western blot检测等方法鉴定提取的外泌体。

3.进行外泌体WB鉴定时有什么内参蛋白可供选择？
没有，该检测属于定性检测。

4.蛋白浓度低？
很多样本外泌体量不够下游应用，在条件允许的情况请尽可能加大植物样本的上样量。
处理部分外泌体样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。请选择高质量的蛋白裂解液或蛋白提取试剂盒。

5.外泌体纯化管内管膜会因为离心时间过长而变干么？
不会，因为内管有死体积，总会有溶液残留在内管中。死体积大约20 μl。

6.可以重复使用过滤管么？
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当，可以反复使用多次。但是超过8次重复使用后过滤膜有破损风险，注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。
参考文献
 Yue Zhang et al. Cancer-associated fibroblasts-derived exosomal miR-17-5p promotes colorectal cancer aggressive phenotype by initiating a RUNX3/MYC/TGF-β1 positive feedback loopCancer Letters 2020  Ruiyu Liu et al. iTRAQ-based proteomics and in vitro experiments reveals essential roles of ACE and AP-N in the renin–angiotensin system-mediated congenital ureteropelvic junction obstructionExperimental Cell Research 2020  Feng Tian et al. miR-210 in Exosomes Derived from Macrophages under High Glucose Promotes Mouse Diabetic Obesity Pathogenesis by Suppressing NDUFA4 ExpressionJournal of Diabetes Research 2020

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