细胞周期检测试剂盒(PI)

BB-4104
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  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥300元
  • ¥650元
  • ¥950元
数量
产品概述 product description

贝博® BBcellProbe® 细胞周期检测试剂盒是利用细胞内DNA能够和荧光染料结合的特性,细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同,流式细胞仪检测的荧光强度也不一样来检测细胞周期。 细胞周期(cell cycle)是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。G1期:细胞开始RNA和蛋白质的合成,但DNA含量仍保持二倍体。S期:DNA开始合成,这时细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。当DNA复制结束成为4倍体时,细胞进入G2期。G2期的细胞继续合成RNA及蛋白质,直到进入M期。因此,单纯从DNA含量无法区分G2期和M期。一旦有丝分裂发生,细胞分裂成两个细胞,这两个细胞或者进入下一个细胞周期,或者进入静止期(G0期),而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。因此,整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M期。通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析,可以得到细胞各个时期的分布状态,计算出G0/G1%、S%、G2/M%,了解增殖能力,在肿瘤病理学研究中,通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。 PI为插入性核酸荧光染料,能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合的量与DNA的含量成正比例关系,用流式细胞仪进行分析,就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态,从而计算出各个期的百分含量。PI染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度
-20℃避光
注意事项
1.染液短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.试剂拆封后请尽快使用完!

有效期
1年
检测方法
流式细胞仪
适用样本
1.悬浮细胞 2.贴壁细胞
产品特点

产品应用
流式细胞仪
仪器准备
1.流式细胞仪
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS 缓冲液(pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X))
2.或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
2.最好使用含EDTA的细胞消化液。
3.洗涤细胞离心转速不可超过800×g。
4.乙醇固定时离心大概采用2000×g力5分钟,离心力太小可能部分细胞难以沉淀。 5.固定时在振荡器上轻轻振荡细胞,并缓慢滴加75%乙醇,直接加入会导致细胞团聚的现象,很难重悬成单细胞。或者先用冷PBS悬浮细胞,充分悬浮,使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇,终浓度为70-90%乙醇。乙醇固定之后须无细胞沉淀。


使用方法
1. 收集样本细胞,细胞数量在5-10X106个。

2. 用冷PBS洗涤细胞两次。

3. 在15ml离心管中,用500 μl PBS重悬细胞。

4. 滴加2-5ml冷乙醇4℃固定过夜或-20℃固定1小时。

5. 取5X106细胞,在15ml锥形离心管中1000×g离心10分钟,弃上清,收集细胞。
6. 用冷PBS洗涤细胞两次。

7. 用500 μl冷PBS重悬细胞。

8. 加入Rnase A溶液20 μl, 37℃水浴30分钟。
9. 用400目细胞筛网过滤。

10. 在1000×g离心10分钟,弃上清,收集细胞。
11. 加入400 μl PI染液重悬细胞,轻轻混匀后4℃避光孵育30分钟-1小时。
12. 流式检测结果。激发波长为488nm。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

常见问题分析
1.染色后找不到细胞?
固定细胞可能难以离心沉淀;固定细胞可能成团;固定细胞膜容易损伤成碎片。操作过程中注意以上几点。

2.可以不固定细胞吗?
本试剂盒可以用于非固定细胞的周期检测。
参考文献
1.Meng Zhang, et al.
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4.Feng Liu, et al.
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Sci Rep. 2016; 6: 21260 (IF 5.228)

5.Fei Fei, et al.
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