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产品概述
product description
贝博® BBcellProbe® M18线粒体染色试剂盒是利用BBcellProbeTM M系列探针进行线粒体特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的BBcellProbeTM M18线粒体染色探针为绿色荧光标记的线粒体探针，具有506/530nm的最大激发/发射波长。 BBcellProbe® M系列探针是对活细胞中的线粒体进行选择性染色的一类荧光染料，该系列探针可以选择性标记线粒体，只需要纳摩尔级（nM）浓度即可有效标记活细胞。BBcellProbe® M系列探针可自由穿过细胞膜，适用于观察线粒体内部生物合成及相关发病机理。 BBcellProbe® M系列线粒体探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的绿色荧光探针，贝博还可以提供红色荧光的染色试剂盒。 BBcellProbe® M18绿色探针会受线粒体膜电位的影响，需要不受线粒体膜电位影响的荧光探针可以选择M16红色荧光探针（相关产品BB-41292）和M17绿色荧光探针（相关产品BB-41293）的产品。
保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
2.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
2.贴壁细胞
产品应用
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
试剂准备
1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.M18染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
2.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
3.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
4.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
5.染色后立即进行分析。
2.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
3.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
4.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
5.染色后立即进行分析。
使用方法
1. 染色工作液配制：
根据样本数量，用染料稀释液将BBcellProbe® M18荧光染料10倍稀释，再用相应的培养基或者HBSS缓冲液50-250倍稀释，配制成染色工作液。
2. 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30分钟～2小时（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。
3）利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。
2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育30分钟～2小时（具体时间需根据细胞类型而定）。
3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4）置于荧光镜下观察。
3. 观察结果：
在激光共聚焦显微镜/荧光显微镜（含合适滤片）下观察细胞。
最大激发/发射波长为506/530nm。
根据样本数量，用染料稀释液将BBcellProbe® M18荧光染料10倍稀释，再用相应的培养基或者HBSS缓冲液50-250倍稀释，配制成染色工作液。
2. 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30分钟～2小时（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。
3）利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。
2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育30分钟～2小时（具体时间需根据细胞类型而定）。
3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4）置于荧光镜下观察。
3. 观察结果：
在激光共聚焦显微镜/荧光显微镜（含合适滤片）下观察细胞。
最大激发/发射波长为506/530nm。
参考文献
1.Zhao Lv, et al.
The modulation of Smac/DIABLO on mitochondrial apoptosis induced by LPS in Crassostrea gigas
Fish & Shellfish Immunology 2019
2.Xican Li, et al.
Inhibitory Effect and Mechanism of Action of Quercetin and Quercetin Diels-Alder anti-Dimer on Erastin-Induced Ferroptosis in Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells
Antioxidants 2020
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