Alamar Blue细胞增殖与毒性检测试剂盒

BB-4206
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产品概述 product description

贝博® BBoneBot® AlamarBlue细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒是应用新型的氧化还原指示剂阿尔玛蓝快速高灵敏度检测细胞增殖和细胞毒性的比色检测产品。 AlamarBlu是一种氧化还原指示剂，能根据代谢活性产生吸光度变化和荧光信号。其在氧化状态下呈现紫蓝色无荧光性，而在还原状态下，转变为呈粉红或红色荧光的还原产物，其吸收峰为530-560nm，而散射峰为590nm。在细胞增殖过程中，细胞内NADPH/NADP、 FADH/FAD、 FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高，处于还原环境。摄入细胞内的染料被这些代谢中间体及细胞色素类还原后释放到细胞外并溶于培养基中，使培养基从无荧光的靛青蓝变成有荧光的粉红色。最后用普通分光光度计或荧光光度计进行检测，吸光度和荧光强度与活性细胞数成正比。这种染料经过验证安全无毒，用于细胞活性和细胞增殖的定量分析以及细胞因子生物测定和体外细胞毒性研究。 这种测定是基于具有代谢活性的细胞将试剂转换成荧光和比色指示剂的能力。 受损和无活性细胞具有较低的天然代谢活性，因此对应的信号较低。 AlamarBlu的无毒特性使细胞可长期暴露于这种染料，因此可随时间进行测量或进行终点测量。 与台盼兰、TTC、MTT、MTS等分析法相比，阿尔玛蓝法具有更多的优势。阿尔玛蓝法采用单一试剂，可以连续、快速地检测细胞的增生状态。由于阿尔玛蓝对细胞无毒、无害，不影响细胞的抗体合成与分泌等活性，因此可以对同一批细胞的增生状态进行连续观察和进一步的实验观察，因此有操作简便和几乎不干扰细胞正常代谢的特点。

保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.长期不用可以-20℃保存。
2.需要长期保存可以分装后-20℃保存，避免反复冻融。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
酶标仪
适用样本
动物细胞
产品特点
1.使用方便：仅使用单一试剂；
2.对哺乳动物或微生物细胞进行灵敏、无毒且安全的细胞活力和增殖测定；
3.能长期使用，持续进行测定而不损伤细胞或产生有毒废物；
4.灵活、简便- 能与多种仪器平台、96 和 384 孔板以及荧光或分光光度法测定兼容；
5.可重复、快速 - 带加样、孵育及测定方案的同质分析对贴壁和悬浮细胞均有良好的可重复性。
产品应用
酶标仪
仪器准备
1.带有450nm滤光片的酶标仪 2. CO2培养箱
试剂准备
1.PBS 2.纯水
耗材准备
1.移液器及吸头 2.96孔培养板

使用注意事项
1.正式实验前，建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入Alamar Blue试剂后的培养时间。
2.合适密度的细胞可以增加检测灵敏度。对于96孔板，我们建议每孔接种100微升细胞，细胞浓度范围为：贴壁细胞在100-10,000/孔，悬浮细胞在2,000-50,000/孔，并以培养基为空白对照。对于384孔板，细胞浓度和接种量均减半。
3.整个过程均应为无菌操作，因为微生物污染物同样可以还原检测试剂而影响实验结果。
4.注意接种细胞浓度和加入检测试剂后孵育时间。细胞浓度过高或孵育时间过长，会导致继发性还原反应，产生无色和荧光消失。
5.孵育时，须避光。
6.本产品可以使用荧光或分光光度检测，但荧光的灵敏度高，实验误差小，推荐使用荧光检测。
使用方法
细胞活性、细胞增殖-毒性检测
1. 细胞的增殖和细胞毒实验，一般可在96孔细胞培养板中进行。
2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞；细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定)。
3. 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物；
4. 培养结束后，取出阿尔玛蓝试剂，置室温融化混匀，于洁净工作台内按10微升/孔加入微孔板中，在细胞培养箱内继续孵育12－24小时，培养液颜色由蓝变为粉红（如采用荧光分光光度法，通常只需孵育2－8小时）；
5. 在570nm测定吸光度。
6. 也可用荧光分光光度法检测，激发光波长560nm（在530-570 nm之间均可），发射光波长为590 nm。
参考文献
1.Bo Liu, et al.
Enhancing Membrane-Disruptive Activity via Hydrophobic Phenylalanine and Lysine Tethered to Poly(aspartic acid)
ACS Applied Materials & Interfaces 2019 （IF=8.097）

2.Yangyu Lu, et al.
Fluphenazine antagonizes with fluconazole but synergizes with amphotericin B in the treatment of candidiasis
Applied Microbiology and Biotechnology 2019 （IF=3.67）

3.Weiwei Hou, et al.
Low magnitude high frequency vibration promotes chondrogenic differentiation of bone marrow stem cells with involvement of β-catenin signaling pathway
Archives of Oral Biology 2020

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