XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

BB-4207
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  • 500T
  • 1000T
价格
  • ¥400元
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  • ¥1150元
数量
产品概述 product description

贝博® BBoneBot® XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒是应用二甲氧唑黄2,3-bis[2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl]-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide快速高灵敏度检测细胞增殖和细胞毒性的比色检测产品。 XTT在电子耦合试剂存在的情况下能够被线粒体内的一些与辅酶Ⅱ相关的脱氢酶还原成橙黄色的水溶性的Formazan,生成的Formazan量与活细胞数量成正比。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数量呈线性关系。 本XTT试剂为配制好的即用型试剂,直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成分,XTT试剂很稳定,对细胞没有毒性,可以长时间孵育细胞。XTT法测定细胞增殖或毒性试验中活细胞数目的灵敏度高,无放射性,检测细胞增殖实验的灵敏度比其它方法如MTT高。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.需要长期保存可以分装后-20℃保存.
2.避免反复冻融。
3.冻存后融解时注意重新充分混匀。
4.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
酶标仪
适用样本
动物细胞
产品特点
1.使用方便:仅使用单一试剂;
2.灵敏度高,数据可靠,重现性好,线性范围更宽;
3.结果稳定:试剂本身稳定性高,实验结果稳定可靠;
4.无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低;
5.适合于高通量药物筛选。
产品应用
酶标仪
仪器准备
1.带有450nm滤光片的酶标仪 2. CO2培养箱
试剂准备
1.PBS 2.纯水
耗材准备
1.移液器及吸头 2.96孔培养板

使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2.需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融,否则将会增加空白吸收,从而影响检测结果。最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。
3.正式实验前,建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入XTT试剂后的培养时间。在1000-100000之间摸细胞数量。
4.部分药物可能对检测有影响,有影响时需换液后检测,无影响时直接检测。用培养基或PBS来配制待检测药物,加入XTT试剂,测药物溶液在450 nm处的吸光度。如果该吸光度与不含药物仅加XTT试剂的培养基或PBS吸光度差异不大,则可以直接加入XTT,如果吸光度相对较大,则需要除去培养基,并用新鲜培养基洗涤细胞两次,然后加入新的100 μl培养基和10 μl XTT进行检测。
5.如果样品为高浑浊度的细胞悬液,或者为了去除其它颜色物质的影响,建议设定600 nm (或600 nm以上) 作为参比波长,以OD450扣除参比波长的O.D值即可。
6.接种时注意细胞悬液一定要混匀,以避免细胞沉淀下来,导致每孔中的细胞数量不等,可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发,为了减少误差,建议培养板的四边每孔只加培养基,而不作为指标检测孔。
使用方法
细胞活性、细胞增殖-毒性检测
1. 收集细胞,加细胞悬液100 μl(约5000-10000个细胞)到96孔板(边缘孔用无菌水或PBS填充)。每板设对照(加100l培养基)。
2. 置37℃,5% CO2孵育过夜,倒置显微镜下观察。
3. 每孔加入10 μl 待检测药物溶液, 37℃孵育。
4. 每孔加入10 μl XTT试剂,37℃孵育1-4 小时。
5. 测定450 nm各孔的吸光值,如无450nm滤光片,可以使用450-490nm的滤光片。同时设置空白孔(培养基和XTT试剂,无细胞),对照孔(不加药培养基和XTT试剂,有细胞),每组设定3-5复孔。

细胞活力计算:
将各测试孔的OD值减去调零孔OD值或对照孔OD值。各重复孔的OD值取平均数。
细胞活力% =(加药细胞OD-空白OD/对照细胞OD-空白OD)×100

细胞数量测定
1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。
2. 按比例 (例如:1/2比例) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。
3. 接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加XTT试剂培养一定时间后测定O.D值,制作出一条以细胞数量为横坐标 (X轴),O.D值为纵坐标 (Y轴) 的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量 (使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入XTT试剂后的培养时间)。
常见问题分析
1.检测时需要换液吗?
如果待测药物有还原性,需要换液,否则不需要。

2.如何判断待测药物是否含有还原性?
测定不含细胞,仅含有待测药物的溶液加入XTT反应后的在490 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小,说明待测药物没有还原性或还原性很小,对XTT没有影响,则可以不换液,在培养基中直接加入XTT ;如果吸光度相对较大,说明药物具有较强的还原性,则需要除去含药物的培养基,并用新鲜培养基洗涤细胞两次,然后加入新的100 μl培养基和10 μl XTT进行检测。
参考文献
1.Ying Li, et al.
Natural product solasodine-3-O-β-D-glucopyranoside inhibits the virulence factors of Candida albicans
FEMS Yeast Research 2015

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