LDH细胞毒性检测试剂盒

BB-4216
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产品概述 product description

贝博® BBcellProbe® LDH乳酸脱氢酶检测试剂盒是利用LDH催化乳酸生成丙酮酸和NADH,NADH通过电子载体将显色剂还原生成显色物质,在450nm处的OD值与LDH成正比,利用此原理可以测定死细胞和受损细胞的LDH漏出情况。 LDH(乳酸脱氢酶)是存在于细胞质的一种酶,LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标,并被广泛用于细胞毒性检测。当细胞膜受到损伤时,LDH 会释放到培养基中。由于释放出的LDH 稳定,检测培养基中LDH 的量可以作为测定死细胞和受损细胞数量的指标。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.LDH反应液长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.试剂拆封后请尽快使用完!

有效期
一年
检测方法
酶标仪
适用样本
动物细胞
产品应用
1.酶标仪 2.分光光度计
仪器准备
1.酶标仪/分光光度计
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒

试剂准备
1.PBS 2.纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.96孔板


使用注意事项
1.LDH反应液短期存放于2-8℃,长期存放请分装后-20℃避光保存。
2.LDH反应液避免反复冻融。
3.LDH反应液冻存后溶解时注意重新混匀。
4.冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活。建议样品准备好后尽量当天完成测定。
5.因为每种细胞的LDH量不同,建议通过预实验确定高LDH对照和低LDH对照的吸光度差异最大的细胞数。
6.培养基中动物血清中的LDH会增加背景吸收,建议设置一个培养基背景对照来校正。
7.动物血清中的LDH活性较高时,可以通过降低血清浓度来减小其中的LDH造成的背景吸收,一般将血清浓度降低到5%会显著减小背景。
8.细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大,都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。
9.若需准确计算出漏出的LDH酶活性的绝对活性,请选用贝博其它货号的试剂盒。
10.不同样本的LDH漏出情况不一样,需要做预实验确定加入LDH反应液后的孵育时间。
11.以下以96孔板培养为例,如果是使用的其它类型的培养板,以实际为准,等比例调整吸入对应规格的试剂即可。
12.因为每种细胞的LDH量不同,为了得到最好的显色效果,推荐做预实验确定最佳细胞量。没条件做细胞数量优化的话,可以选择较高细胞量实验。

使用方法
LDH测定:
1. 吸取50 μl用培养基稀释过的细胞悬液至96孔板中。
2. 加入50 μl含有药物的培养基(按表A)。
3. 在37℃ CO2培养箱内培养合适的时间。
4. 在高LDH对照孔、高LDH空白对照孔中加入10 μl LDH提取液后,在样品、样品空白、低LDH对照孔和背景空白孔中加入10 μl培养基(按表A),在37℃ CO2培养箱内培养30-45分钟。
5. 96孔板离心2 min (250×g),使悬浮细胞沉淀。
6. 从每个孔中吸取100 μl上清液至另一个新的96孔板中。
7. 在新的96孔板每个孔中加入10 μl LDH反应液B后,在室温避光的条件下培养30分钟-4小时。
8. 用酶标仪测定450 nm 的吸光度。 LDH计算:
计算 待测样品孔-样品空白孔、高LDH对照孔-高LDH对照空白孔、低LDH对照孔-背景空白孔 的吸光度后,算出各种孔的复孔平均值。
细胞损伤率/毒性根据如下公式算出。

细胞损伤率/死亡率/毒性(%) = [(ODA - ODC)/( ODB - ODC)] ×100%

其中:
ODA:样品的吸光度 (待测样品孔-样品空白孔)
ODB:高LDH对照的吸光度 (高LDH对照孔-高LDH对照空白孔)
ODC:低LDH对照的吸光度 (低LDH对照孔-背景空白孔)


参考文献
1.Gang Wang, et al.
Quercetin-loaded freeze-dried nanomicelles: Improving absorption and anti-glioma efficiency in vitro and in vivo
Journal of Controlled Release 2016 (IF=7.901)
2.Gang Wang, et al.
In vitro and in vivo evaluation of functionalized chitosan–Pluronic micelles loaded with myricetin on glioblastoma cancer
Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine 2016 (IF=6.5)

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