2-8℃避光

1.长期不用可以-20℃保存。
2.染色液避免反复冻融。多次冻融会导致失效。
3.染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
4.试剂拆封后请尽快使用完！

一年

酶标仪

细菌

1.使用方便：仅使用单一试剂；
2.灵敏度高，数据可靠，重现性好，线性范围更宽；
3.结果稳定：试剂本身稳定性高，实验结果稳定可靠；
4.无需放射性同位素和有机溶剂，对微生物毒性低；
5.适合于高通量药物筛选。

酶标仪

1.带有450nm滤光片的酶标仪
2.CO2培养箱
3.离心机
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

1.PBS 2.HBSS

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.96孔培养板

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融，否则将会增加空白吸收，从而影响检测结果。最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。
3.正式实验前，建议先做几个孔摸索接种细菌的数量和加入CCK- 8试剂后的培养时间。培养时间一般在1-4小时。
4.部分药物可能对检测有影响，有影响时需去除药物后再检测，无影响时直接检测。用培养基或PBS来配制待检测药物，加入CCK-8试剂，测药物溶液在450 nm处的吸光度。如果该吸光度与不含药物仅加CCK-8试剂的培养基或PBS吸光度差异不大，则可以直接加入CCK-8，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用新鲜培养基洗涤菌体两次，然后加入新的100μl培养基和10μl CCK-8进行检测。
5.接种时注意菌液一定要混匀，以避免菌体沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为了减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基，而不作为指标检测孔。
6.最佳细胞接种数量的选择，可以用不同的细胞数接种，然后加入CCK-8 试剂，1小时，2小时，3小时检测450nm 以OD值1.0左右为标准选择细胞数。
7.有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加 CCK- 8试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰O.D值读数。
8.如果不是使用96孔板检测，CCK-8溶液的用量相应等比例增加即可。
9.本试剂盒用于细菌的检测，不可用于酵母检测。
10.CCK-8试剂加样量较小时，也可以用培养基稀释CCK-8试剂后加样以减小误差。
11.本试剂无细胞毒性，可以在检测后进行细胞培养，也可以再进行其他检测。
12.某些实验中吸光度值太高，可以减少细胞数量，或者缩短加入CCK-8后的培养时间。
13.如果OD值偏低，可以适当增加细胞数量或延长加入CCK-8后的培养时间。
14.接种细胞时要充分重悬，接种均匀。细胞是否接种均匀对结果影响较大。
15.OD值在0.5-2.0之间均可，最大值控制在1.0左右最佳，小于0.5或大于2.0请调整接种量和培养时间。
16.如果细胞数据出现异常增加，或者数据结果的方向相反等问题，可能是实验中产生了气泡、铺板不均匀等操作问题，请重复实验。

1. 制备适当浓度微生物细胞的悬液，在96孔板内每孔接种190μl悬液。
2. 每孔加入10μl的染色溶液。
3. 将培养板在培养箱中培养（37℃或合适的温度）。
4. 用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

细胞活力计算：
各重复孔的OD值取平均数。
细胞活力% =（测试孔OD-空白OD/对照孔OD-空白OD）×100

1.ShengWei Luo, et al.
Antibacterial and immunoregulatory activity of a novel hepcidin homologue in diploid hybrid fish (Carassius auratus cuvieri ♀ × Carassius auratus red var ♂)
Fish & Shellfish Immunology 2020

2.Xican Li, et al.
The mechanism of (+) taxifolin’s protective antioxidant effect for •OH-treated bone marrow-derived mesenchymal stem cells
Cellular & Molecular Biology Letters 2017