酵母活性检测试剂盒-AlamarBlue

BB-4231
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产品概述 product description

贝博TM BBoneBot® AlamarBlue酵母活性检测试剂盒是应用新型的氧化还原指示剂阿尔玛蓝快速高灵敏度检测酵母活性的比色检测产品。 贝博TM BBoneBot® AlamarBlue是一种氧化还原指示剂，能根据酵母的代谢活性产生吸光度变化和荧光信号。这种测定是基于具有代谢活性的细胞将试剂转换成荧光和比色指示剂的能力。 受损和无活性细胞具有较低的天然代谢活性，因此对应的信号较低。 贝博TM BBoneBot® AlamarBlue在氧化状态下呈现紫蓝色无荧光性，而在还原状态下，转变为呈粉红或红色荧光的还原产物，其吸收峰为530-560nm，而散射峰为590nm。在酵母细胞增殖过程中，细胞内处于还原环境。进入酵母细胞内的活性检测染料被代谢中间体及细胞色素类还原后释放到酵母细胞外并溶于培养基中，使培养基从无荧光的靛青蓝变成有荧光的粉红色。最后用普通分光光度计或荧光光度计进行检测，吸光度和荧光强度与活性酵母细胞数成正比。染料经过验证安全无毒，可以用于酵母细胞活性和酵母细胞增殖的定量分析细胞毒性研究。 AlamarBlue的无毒特性使酵母细胞可长期暴露于这种染料，因此可随时间进行测量或进行终点测量。 贝博TM BBoneBot® AlamarBlue法采用单一试剂，可以连续、快速地检测酵母细胞的增生状态。由于AlamarBlue对酵母细胞无毒、无害，不影响细胞的蛋白质合成与分泌等活性，因此可以对同一批酵母细胞的增生状态进行连续观察和进一步的实验观察，因此有操作简便和几乎不干扰酵母细胞正常代谢的特点。

保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.长期不用可以-20℃保存。需要长期保存可以分装后-20℃保存，避免反复冻融。
2.冻存后融解时注意重新混匀。
有效期
一年
检测方法
酶标仪或分光光度计
适用样本
酵母
产品特点
1.使用方便：仅使用单一试剂；
2.灵敏度高，数据可靠，重现性好，线性范围更宽；
3.结果稳定：试剂本身稳定性高，实验结果稳定可靠；
4.无需放射性同位素和有机溶剂，对微生物毒性低；
5.适合于高通量药物筛选。
产品应用
酶标仪或分光光度计
仪器准备
1.带有450nm滤光片的酶标仪 2. CO2培养箱
试剂准备
1.PBS 2.HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

使用注意事项
1.正式实验前，建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入Alamar Blue试剂后的培养时间。
2.整个过程均应为无菌操作，因为微生物污染物同样可以还原检测试剂而影响实验结果。
3.注意接种细胞浓度和加入检测试剂后孵育时间。细胞浓度过高或孵育时间过长，会导致继发性还原反应，产生无色和荧光消失。
4.孵育时，须避光。
5.本产品可以使用荧光或分光光度检测，但荧光的灵敏度高，实验误差小，推荐使用荧光检测。
使用方法
1. 收集待检测的酵母细胞。
2. 用PBS或生理盐水洗涤酵母细胞2次。
3. 将酵母细胞用PBS重悬，调整细胞悬液浓度为1x107/ml。
4. 96孔板中每孔加入200微升细胞悬液。将AlamarBlue活性检测试剂于洁净工作台内按10微升/孔加入微孔板中，在细胞培养箱内继续孵育2－12小时，液体颜色部分出现由蓝变为粉红为止（如采用荧光分光光度法，只需孵育0.5－6小时）；
5. 在570nm测定吸光度，参考波长600nm。如无此滤光片， 可用565 nm 和 610 nm的滤光片替代。
6. 也可用荧光分光光度法检测荧光强度，激发光波长在530-560 nm之间，发射光波长为590 nm。

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