线粒体超氧化物染色试剂盒（绿色荧光）

BB-441153
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产品概述 product description


贝博® BBcellProbe® M23线粒体超氧化物染色/检测试剂盒是利用贝博® BBcellProbe® M系列探针进行线粒体超氧化物特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的BBcellProbe® M23线粒体超氧化物染色探针为绿色荧光标记的线粒体探针，具有510/580 nm的最大激发/发射波长。
贝博® BBcellProbe® M23线粒体超氧化物染色探针是一种细胞渗透型的对活细胞中的线粒体体进行选择性染色的一类新型荧光染料，该探针可以选择性标记线粒体，包含标记线粒体的弱巯基反应性的氯甲基官能团。只需简单孵育细胞，即可穿过细胞膜并直接聚集在活性线粒体上。一旦进入线粒体后，快速被超氧化物氧化，并产生绿色荧光。BBcellProbe® M23线粒体超氧化物染色探针只可被超氧化物氧化，而不被其他活性氧类(ROS)和活性氮类(RNS)氧化。氧化产物结合核酸后，可产生大量绿色荧光。
按每个样用100 ul染料计，试剂盒可以做30-150个样或60-300个样。
贝博® BBcellProbe® 系列线粒体探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的绿色荧光探针，贝博还可以提供红色、蓝色、橙色等颜色的染色试剂盒。
贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、铁死亡、铜死亡、细胞自噬、衰老、焦亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、信号传导、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、糖酵解、缺氧、细胞内pH、细胞粘附、细胞形态、生长、分化、迁移等数百种细胞检测试剂盒产品。

保存温度
-20℃保存
注意事项
1. 有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。
2. 试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
1. 荧光显微镜
2. 激光共聚焦
适用样本
1. 悬浮细胞
2. 贴壁细胞
产品应用
1. 荧光显微镜
2. 激光共聚焦
仪器准备
1. 激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
冰盒
试剂准备
1. 无水DMF（CAS号：68-12-2）
2. PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
使用注意事项
1. 预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
3. 配制探针母液时，一定要注意充分将管底的探针溶解。
4. 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
5. 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
6. 染色后立即进行分析。
使用方法
1、 染色母液配制：
小包装试剂盒（BB-441153-30T）的探针管中加入10 μl无水DMF，充分溶解。
大包装试剂盒（BB-441153-60T）的探针管中加入20 μl无水DMF，充分溶解。
2、 染色工作液配制：
根据样本数量，用探针稀释液将BBcellProbe® M23荧光染料母液10倍稀释，再用HBSS缓冲液或者相应的培养基50-100倍稀释，配制成染色工作液。
3、 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1）培养皿/培养板准备细胞样本。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下避光孵育30分钟～60分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）利用新鲜培养基替换上述染色液。
4）荧光显微镜（含合适滤片）或激光共聚焦显微镜、荧光酶标仪下观察。最大激发/发射波长为488 / 510 nm。

2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下避光孵育30分钟～60分钟（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4）置于荧光镜下观察。或流式细胞仪、荧光酶标仪检测。最大激发/发射波长为510 / 580nm。

阳性对照（选做）：
（可选阳性对照）为了诱导线粒体超氧化物，可以将细胞在含30 μM MitoPQ（CAS No.:1821370-28-8）的低葡萄糖培养基中孵育细胞18小时后染色。
参考文献
Cheng An et al.
IQGAP1 promotes mitochondrial damage and activation of the mtDNA sensor cGAS-STING pathway to induce endothelial cell pyroptosis leading to atherosclerosis
International Immunopharmacology 2023 （IF 5.714）
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