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产品概述
product description
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内。 贝博® BBcellProbe® 碱性磷酸酶染色试剂盒(改良Gomori钙钴法) 采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性。此法以天然存在的β-甘油磷酸钠为底物，经酶水解释放出磷酸，磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀，再依次被置换为磷酸钴和硫化钴，最终产物为黑色硫化钴沉淀。 该染色试剂盒可用于冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
显微镜
适用样本
1. 石蜡切片
2. 冰冻切片
2. 冰冻切片
仪器准备
1. 显微镜
2. 温箱或水浴锅
3. 移液器
4. 冰箱5. 湿盒
2. 温箱或水浴锅
3. 移液器
4. 冰箱5. 湿盒
试剂准备
蒸馏水
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 载玻片
4. 一次性手套
2. 吸头
3. 载玻片
4. 一次性手套
使用注意事项
1. 所有的工作液请使用前新鲜配制，配制后立即使用。
2. ALP孵育液、ALP硫化液易失效，最好分成小分储存，一经开启立即使用。
3. ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。
4. 对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
5. 样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
6. 组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。
7. 组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52～54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。
8. 不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR级以上的二甲苯。
2. ALP孵育液、ALP硫化液易失效，最好分成小分储存，一经开启立即使用。
3. ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。
4. 对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
5. 样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
6. 组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。
7. 组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52～54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。
8. 不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR级以上的二甲苯。
使用方法
1. 石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
2. 冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液中4℃固定2-5分钟。
3. 切片入试剂A，37℃孵育。冰冻切片5-15分钟，石蜡切片2-12小时。
4. 流水冲洗2分钟后入蒸馏水。
5. 入试剂B，37℃，5分钟。
6. 流水冲洗5分钟后入蒸馏水。
7. 在上述操作过程中配置ALP硫化工作液：试剂C用蒸馏水50倍稀释，即配即用。
8. 切片入ALP硫化工作液孵育2分钟。
9. 流水冲洗10分钟后入蒸馏水。
10. （可选）核固红复染细胞核，蒸馏水洗；
10. 冰冻切片用甘油明胶封片；石蜡切片常规脱水，透明，树胶封片。
【注】：可根据需要复染细胞核。
结果分析：
酶活性部位： 黑色硫化钴沉淀
细胞核 根据复染液不同而不同
阴性对照片处理方法：（选做）
1. ALP对照液为不含底物的孵育液。取相同的切片入ALP对照液，其余同上，结果为阴性；
2. （备选方案）切片入ALP孵育液前，可先经碘液和5%硫代硫酸钠溶液各3分钟，充分水洗后，再进行孵育等步骤，可用此法作阴性对照。
2. 冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液中4℃固定2-5分钟。
3. 切片入试剂A，37℃孵育。冰冻切片5-15分钟，石蜡切片2-12小时。
4. 流水冲洗2分钟后入蒸馏水。
5. 入试剂B，37℃，5分钟。
6. 流水冲洗5分钟后入蒸馏水。
7. 在上述操作过程中配置ALP硫化工作液：试剂C用蒸馏水50倍稀释，即配即用。
8. 切片入ALP硫化工作液孵育2分钟。
9. 流水冲洗10分钟后入蒸馏水。
10. （可选）核固红复染细胞核，蒸馏水洗；
10. 冰冻切片用甘油明胶封片；石蜡切片常规脱水，透明，树胶封片。
【注】：可根据需要复染细胞核。
结果分析：
酶活性部位： 黑色硫化钴沉淀
细胞核 根据复染液不同而不同
阴性对照片处理方法：（选做）
1. ALP对照液为不含底物的孵育液。取相同的切片入ALP对照液，其余同上，结果为阴性；
2. （备选方案）切片入ALP孵育液前，可先经碘液和5%硫代硫酸钠溶液各3分钟，充分水洗后，再进行孵育等步骤，可用此法作阴性对照。
常见问题分析
1.本试剂盒可以用于细胞样本的染色吗？
本试剂盒不适用于细胞样本的染色，如果需要用于细胞样本，可以选择贝博货号为BB-44275的试剂盒。
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本试剂盒不适用于细胞样本的染色，如果需要用于细胞样本，可以选择贝博货号为BB-44275的试剂盒。
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参考文献
1.HaiyueYu, XiaoyiZhang, et al.
Effects of 3-dimensional Bioprinting Alginate/Gelatin Hydrogel Scaffold Extract on Proliferation and Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells
Journal of Endodontics 2019 （IF=2.886）
Effects of 3-dimensional Bioprinting Alginate/Gelatin Hydrogel Scaffold Extract on Proliferation and Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells
Journal of Endodontics 2019 （IF=2.886）
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