2-8℃避光

1.有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。
2.试剂拆封后请尽快使用完！

一年

显微镜

培养细胞

显微镜

PBS或HBSS

1.细胞培养器皿
2.吸头
3.一次性手套

1. β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意防护。
2. β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH条件，不能在二氧化碳培养箱中进行染色反应。用于细胞培养的二氧化碳培养箱中较高浓度的二氧化碳会影响染色工作液的pH值，而导致染色失败。
3. β-半乳糖苷酶染色液B在刚刚溶解后会观察到有沉淀，属正常现象，充分混匀，沉淀会全部溶解。作为常规，试剂使用前必须确保沉淀全部溶解，并且混匀。
4. 配制染色工作液时需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯(polystyrene)容器。但染色时可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中进行，例如普通的6孔板就可以用作染色的容器。

操作步骤（仅供参考）
染色工作液的配制方法如下：

试剂C：β-半乳糖苷酶染色液A 12.5ul
试剂D：β-半乳糖苷酶染色液B 12.5ul
试剂E：β-半乳糖苷酶染色液C 925ul
试剂B：X-Gal溶液 50ul

注意：
1. 使用聚丙烯容器，不能使用聚苯乙烯容器配置染色工作液。
2. 对于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的简单的判定方法：聚丙烯容器可以高温高压灭菌；而聚苯乙烯容器不适合高温高压灭菌，一旦高温高压就会严重变形。

（一）贴壁细胞染色：
1、 对于6孔板中培养的贴壁细胞，吸除细胞培养液，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1ml试剂A：β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15min。
【注】：对于其他类型的培养板，固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。
2、 吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞2-3次，每次3min。
3、 吸除PBS或HBSS，每孔加入1ml 染色工作液。以充分盖住样品为宜。
4、 37℃孵育2h至过夜，直至样品显蓝色，一般2-3h会有蓝色出现，12-16h后达到最大显色。可以用parafilm或保鲜膜封住防止蒸发。以充分盖住样品为宜。
【注】：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。
5、 普通光学显微镜观察。
如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入2mlPBS，4℃可保存数天；
或者加上封片液封片后，4℃可保存较长时间。
（二）悬浮细胞染色：
1、 离心收集细胞至1.5ml离心管内，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1ml试剂A：β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15min。
【注】：固定时可以在摇床上缓慢摇动，以免细胞结团。
2、 低速离心，吸除细胞固定液，用PBS或HBSS洗涤细胞2-3次，每次3min。
3. 低速离心、吸除PBS或HBSS，每管加入0.5~1ml 染色工作液。
4. 37℃孵育2h至过夜。直至样品显蓝色，一般2-3h会有蓝色出现，12-16h后达到
最大显色。可以用parafilm或保鲜膜封住防止蒸发。以充分盖住样品为宜。
【注】：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。
5. 取部分染色后的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜观察。
如不能及时观察计数，可以离心去除染色工作液，加入1mlPBS，4℃可保存数天；
如离心，取细胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可保存较长时间。