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产品概述
product description
贝博TM BBcellProbe® ATPase染色(钙钴法)试剂盒是利用三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷为二磷腺苷和磷酸，磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀，再依次被置换为磷酸钴和硫化钴，最终产物为黑色硫化钴沉淀。
三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase，ATPase)是一种水解酶，是催化ATP合成的一种酶。三磷酸腺苷酶根据所用激活剂、抑制剂以及酶定位的不同分为膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、线粒体三磷酸腺苷酶等。ATPase能水解三磷酸腺苷为磷酸腺苷和磷酸，此酶只作用于磷酸与磷酸之间的高能键，因而释放大量能量。
贝博TM BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
保存温度
2-8℃密封避光
注意事项
1.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
光学显微镜
适用样本
切片
产品应用
光学显微镜
仪器准备
恒温箱
试剂准备
1.中性福尔马林固定液
2.蒸馏水
2.蒸馏水
耗材准备
1.玻片
2.染缸
2.染缸
使用注意事项
1.ATP孵育液、硫化液易失效，最好分成小分储存，一经开启立即使用。
2.硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。
3.对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
4.以下步骤仅供参考，以实际样本和预实验情况进行调整，或者参考文献。
2.硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。
3.对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。
4.以下步骤仅供参考，以实际样本和预实验情况进行调整，或者参考文献。
使用方法
冰冻切片/细胞爬片/涂片：
1. 冰冻切片直接入蒸馏水。
2. 入钙盐溶液中37℃温箱。
3. 入ATPase孵育液孵育，蒸馏水洗1min。
4. 入硝酸钴溶液，入蒸馏水。
5. 入中性福尔马林室温固定，流水冲洗2min。
6. 在上述过程中配制硫化工作液，即取试剂(E)用蒸馏水稀释50倍, 即为硫化工作液，即配即用。
7. 切片入硫化工作液孵育。
8. 流水洗10min后，入蒸馏水。
9. 甘油明胶封固。石蜡切片：
1. 石蜡切片脱蜡后，入蒸馏水。
2. 入钙盐溶液中37℃温箱。
3. 入ATPase孵育液孵育，蒸馏水洗1min。
4. 入硝酸钴溶液，入蒸馏水。
5. 入中性福尔马林室温固定，流水冲洗2min。
6. 在上述过程中配制硫化工作液，即取试剂(E)用蒸馏水稀释50倍, 即为硫化工作液，即配即用。
7. 切片入硫化工作液孵育。
8. 流水洗10min后，入蒸馏水。
9. 石蜡切片经95%乙醇溶液及无水乙醇脱水。
10. 二甲苯透明，树胶封片。。染色结果：
酶所在阳性部位 黑色或深棕色沉淀
阴性对照(可选做)：
1. 取对照切片，用试剂F-ATPase对照液进行孵育，并与用ATPase孵育液孵育的切片进行比较。两者反应相同部位可能有非特异性磷酸(单酯)酶存在，两者不同部位才是ATP酶活性所在。
2. 将切片入80℃蒸馏水10min，再与其他组织切片同时孵育，结果应为阴性。
1. 冰冻切片直接入蒸馏水。
2. 入钙盐溶液中37℃温箱。
3. 入ATPase孵育液孵育，蒸馏水洗1min。
4. 入硝酸钴溶液，入蒸馏水。
5. 入中性福尔马林室温固定，流水冲洗2min。
6. 在上述过程中配制硫化工作液，即取试剂(E)用蒸馏水稀释50倍, 即为硫化工作液，即配即用。
7. 切片入硫化工作液孵育。
8. 流水洗10min后，入蒸馏水。
9. 甘油明胶封固。石蜡切片：
1. 石蜡切片脱蜡后，入蒸馏水。
2. 入钙盐溶液中37℃温箱。
3. 入ATPase孵育液孵育，蒸馏水洗1min。
4. 入硝酸钴溶液，入蒸馏水。
5. 入中性福尔马林室温固定，流水冲洗2min。
6. 在上述过程中配制硫化工作液，即取试剂(E)用蒸馏水稀释50倍, 即为硫化工作液，即配即用。
7. 切片入硫化工作液孵育。
8. 流水洗10min后，入蒸馏水。
9. 石蜡切片经95%乙醇溶液及无水乙醇脱水。
10. 二甲苯透明，树胶封片。。染色结果：
酶所在阳性部位 黑色或深棕色沉淀
阴性对照(可选做)：
1. 取对照切片，用试剂F-ATPase对照液进行孵育，并与用ATPase孵育液孵育的切片进行比较。两者反应相同部位可能有非特异性磷酸(单酯)酶存在，两者不同部位才是ATP酶活性所在。
2. 将切片入80℃蒸馏水10min，再与其他组织切片同时孵育，结果应为阴性。
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