细胞悬液制备试剂盒

BB-4511
选择规格
  • 100ml
价格
  • ¥600元
数量
产品概述 product description

贝博® BBproExtra® 细胞悬液制备试剂盒应用蛋白酶的消化作用和非酶的化学作用使组织中细胞间的桥连结构松动,使团块膨松,由块状变成絮状,再采用机械法,用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡,使细胞团块得以较充分的分散,制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液。制备的细胞悬液可用于原代培养、流式细胞仪进行细胞生物学(如凋亡、增殖、细胞周期等)研究、细胞胞内酶学测定、信号传递分子、代谢、蛋白或 DNA 提取、Western Blot、2D-胶、ELISA、、蛋白质组学等研究。
适用范围:各种动物组织,从中分离各种细胞,包括肝细胞,心肌细胞,神经和内皮细胞,软骨细胞,脂肪细胞,成纤维细胞,青蛙卵母细胞,胰岛,肿瘤细胞以及其它细胞。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、铁死亡、铜死亡、细胞自噬、衰老、焦亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、信号传导、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、糖酵解、缺氧、细胞内pH、细胞粘附、细胞形态、生长、分化、迁移等数百种细胞检测试剂盒产品。
贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度
2-8℃
注意事项
1. 试剂拆封后请尽快使用完!
2. 所有组分均过滤除菌 所有组分均过滤除菌,请注意无菌操作
有效期
一年
适用样本
组织
仪器准备
1. 离心机
2. 振荡器
3. 振荡器
4. 涡旋混匀器
5. 移液器
6. 冰箱
7. 冰盒
试剂准备
1. PBS缓冲液
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 70 μm细胞筛
使用注意事项
1. 预实验很重要。必须要做预实验,在正式实验之前取少量样本优化实验条件,并像正式样本一样认真进行,看实验结果是否可行,实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性,不同样本的实验条件通常差异较大,同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同,为了避免浪费正式样本和试剂,一定要提前预实验优化实验条件。
2. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
3. 组织取材需新鲜、无菌、操作轻柔防止机械损伤、尽量去除无用组织、避免干燥;
4. 充分漂洗去除血清及离子,以避免其影响消化酶的活性;
5. 消化酶不宜浓度过高、时间过长,避免对细胞产生毒性反应及消化产生多种杂质细胞;
6. 消化后尽量去除消化液,以防止毒性作用,并且动作要轻,以避免膨松的细胞随漂洗而丢失;
7. 部分分离的细胞如需进一步培养,请参照相关文献的细胞培养条件;
8. 如果消化不完全或细胞被损伤,应根椐情况相应调整消化液的浓度、消化时间或消化温度,除表 A (见下页)推荐的消化条件之外,亦可参考表 B 及表C(见下页)来建立适合各自样本的消化条件:
使用方法
1. 无菌的解剖剪将实体组织剪成 2-3 mm3 小块(至少 0.5~1cm3)或糊糜状;
2. 加入适量试剂A漂洗三次,每次尽量除去试剂A;
3. 用试剂A将消化酶 B 稀释成一定浓度的消化酶 B 工作液,在组织中加入适量的消化酶 B
4. 静置后小心弃去消化液上清,轻轻加入少许试剂A(可加入 0.25 %小牛血清)漂洗三次;
5. 机械分散,用吸管吹打或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡,使组织分散,用 100~200 目不锈钢网或铜网或尼龙网(70 μm细胞筛)研磨过滤;
6. 吸上述滤液,1500 r/min 离心 2 min,弃上清。细胞沉淀加入适量试剂A同样清洗、离心三次;
7. 沉淀加入适宜的培养液,轻轻吹打制成细胞悬液,计数后,进行进一步接种培养或其它研究。
常见问题分析
1. 细胞得率低?
优化酶组合(如酶B+C,或者自行添加0.01% DNAseⅠ)
采用三步消化法(消化 - 收集 - 再消化)。

2. 细胞活力低?
缩短消化时间,降低酶浓度,或使用预冷PBS终止消化。

3. 细胞悬液中碎片过多?
缩小过滤孔径(如70 μm → 40 μm),或延长洗涤次数。

4. 细胞聚团?
增加机械分散力度;增加DNase处理。