超氧阴离子检测试剂盒(•O2–检测试剂盒)-绿色荧光

BB-46067
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产品概述 product description

贝博® BBoxiProbe® 超氧阴离子(O2•-)检测试剂盒是一种利用超氧阴离子特异性荧光探针BBoxiProbe® O76进行超氧阴离子检测的试剂盒。 BBoxiProbe® O76可自由透过活细胞膜进入细胞内,并被细胞内的超氧阴离子(O2•-)氧化,产生绿色荧光产物。绿色荧光强度与细胞内超氧阴离子水平成正比,检测O76产物的荧光强度就可以知道细胞内超氧阴离子的水平。 根据活细胞中绿色荧光强度的差异,可以判断细胞O2•-含量的多少和变化。是一种快速简便的培养活细胞中超氧阴离子检测方法。在激发波长506 nm,发射波长526 nm附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光,从而测定细胞内超氧阴离子(O2•-)水平。 本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的超氧阴离子的快速定性检测。通过荧光强度的大小来快速确定具体的干预措施(如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控等)如何影响细胞的超氧阴离子变化,超氧阴离子增加的样本荧光强度大。 除了本绿色荧光检测试剂盒外,贝博还可以提供红色荧光的超氧阴离子检测试剂(相关产品:BB-460672)。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。 贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。 贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。

保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
一年
检测方法
1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品特点
1.使用方便:可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。 2.荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.原位检测必须使用荧光检测专用的黑色透明底96孔细胞培养板。
6.以下操作步骤仅供参考,请根据实际样本情况调整或参考文献。
使用方法
BBoxiProbe® O76探针标记:
1. BBoxiProbe® O76溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲液、PBS缓冲盐溶液稀释到所需浓度,200-500倍稀释,以此染色工作液更换细胞培养基;也可直接向细胞孵育液体中加入BBoxiProbe® O76探针溶液至所需浓度。
2. 依据细胞超氧阴离子含量的不同,BBoxiProbe® O76终浓度可选择在200-500倍稀释的范围,孵育时间可选择10-90 分钟,在37℃或室温进行避光孵育。
3. 孵育结束后,用新鲜溶液清洗细胞。
4. 用相关仪器进行荧光检测。

对于原位标记探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接拍照分析,或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。

对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测,用激光共聚焦显微镜直接拍照分析也可以。

使用488 nm激发波长,526 nm发射波长,实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱变化。

荧光显微镜检测:
1. 对贴壁生长细胞,可直接在荧光显微镜下观察;对悬浮生长细胞,取25-50 μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上,再盖上一张盖玻片。
2. 荧光显微镜下,用蓝光或绿光激发,观察和拍摄细胞绿色发射图像,超氧阴离子阳性细胞在整个核区被染成绿色.

流式细胞仪分析:
1. 对贴壁生长细胞,用胰酶消化制备成单细胞悬液;对悬浮生长细胞,直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞(5~10万)。
2. 采用480~535 nm波长激发,测定526 nm的发射,测定样本细胞的平均荧光强度值。
细胞可能分成两个亚群:超氧阴离子(O2•-)阴性细胞仅有很低的荧光强度,超氧阴离子阳性细胞有较强的绿色荧光。
常见问题分析
1.结果如何分析?
通过设置参照样本,以参照样本的倍数来反映目标样本相对含量变化,这个“相对”是针对参照的。分析结果是定性的,也是没有单位的,因为它本质上是一个比值(目标/参照)。反映的是模型样本通过具体的干预措施(如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控等)如何影响其O2•-的变化,测定其O2•-是增加或者降低了。
参考文献
1.Yinghui Shang et al.
Zirconia Nanoparticles Induce HeLa Cell Death Through Mitochondrial Apoptosis and Autophagy Pathways Mediated by ROS
Frontiers in Chemistry 2021

2.Minfa Zhang et al.
GPR12 inhibits migration and promotes apoptosis in esophageal cancer and hypopharyngeal cancer cells
Thoracic Cancer 2021

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