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产品概述
product description
贝博®BBoxiProbe·O14 细菌活性氧(ROS)检测试剂盒是一种利用荧光探针BBoxiProbe"O14 进行活性氧检测的试剂盒。O14 探针可自由透过细菌细胞膜进入细胞内，并被细菌细胞内的 ROS 氧化，产生深红色荧光物质，并稳定存在于细菌胞内。根据细菌细
胞中红色荧光的强弱，可以判断细菌细胞 ROS 含量的变化情况。
在激发波长 658 nm，发射波长 676 nm 附近，使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等可以检测荧光强度的设备，可以方便测定荧光强度情况。
保存温度
-20℃避光
注意事项
1.探针短期内经常使用可以 2-8℃℃保存。
2.长期不用-20℃℃保存。避免反复冻融。可以根据需要分装后冻存。
3.染色液 A 为 DMSO 溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需
要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
2.长期不用-20℃℃保存。避免反复冻融。可以根据需要分装后冻存。
3.染色液 A 为 DMSO 溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需
要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
荧光分光光度计 、荧光酶标仪 / 流式细胞仪 / 荧光显微镜 / 激光共聚焦
适用样本
革兰氏阳性及阴性细菌
产品特点
1.使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
2.背景低，灵敏度高；
3.线性范围宽，使用方便。
2.背景低，灵敏度高；
3.线性范围宽，使用方便。
仪器准备
1.荧光分光光度计或荧光酶标仪或流式细胞仪，
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
5.O14在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。
6.对不同的细菌样本，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察ROS的变化。应根据预实验情况调整染色浓度和时间。
2.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
5.O14在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。
6.对不同的细菌样本，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察ROS的变化。应根据预实验情况调整染色浓度和时间。
使用方法
O14探针工作液配制：
1. 根据样本数量，用纯水将探针稀释液B进行10倍稀释。
2. 根据样本数量，用10倍稀释过的探针稀释液B将探针进行200-500倍稀释。即配成染色工作液。
O14探针标记：
1. 准备1 ml新鲜待测菌液。
2. 将待测细菌样本离心收集菌体。
3. 用PBS洗涤菌体2-3次。离心收集菌体沉淀。
4. 用100-250 μl 染色工作液重悬菌体。
5. 在37℃避光孵育30-60分钟。
6. 孵育结束后，离心收集菌体。
7. 用PBS清洗细胞一次。离心收集菌体。
8. 用500 μl PBS重悬菌体。充分混匀。
9. 取200 μl加入荧光检测用黑色96孔板。
10. 置于酶标仪中，后于激发波长为658 nm、发射波长676 nm检测荧光强度。
结果处理：
荧光强度强，细菌活性氧强度高。
1. 根据样本数量，用纯水将探针稀释液B进行10倍稀释。
2. 根据样本数量，用10倍稀释过的探针稀释液B将探针进行200-500倍稀释。即配成染色工作液。
O14探针标记：
1. 准备1 ml新鲜待测菌液。
2. 将待测细菌样本离心收集菌体。
3. 用PBS洗涤菌体2-3次。离心收集菌体沉淀。
4. 用100-250 μl 染色工作液重悬菌体。
5. 在37℃避光孵育30-60分钟。
6. 孵育结束后，离心收集菌体。
7. 用PBS清洗细胞一次。离心收集菌体。
8. 用500 μl PBS重悬菌体。充分混匀。
9. 取200 μl加入荧光检测用黑色96孔板。
10. 置于酶标仪中，后于激发波长为658 nm、发射波长676 nm检测荧光强度。
结果处理：
荧光强度强，细菌活性氧强度高。
常见问题分析
1.活性氧结果如何分析？
ROS是多种物质的统称，不像某一单一活性氧指标，无法检测其绝对的含量，只能通过设置参照样本，以参照样本的倍数来反映目标样本相对含量变化，这个“相对”是针对参照的。分析结果是定性的，也是没有单位的，因为它本质上是一个比值（目标/参照）。反映的是模型样本通过具体的干预措施（如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控等）如何影响其ROS的变化，测定其ROS是增加或者降低了。
2.荧光强度在变化？
可以观察到荧光的逐渐增加（由于自动氧化）或减少（由于细胞中的染料损失或光漂白）。在没有任何刺激或诱导的情况下，健康的未经处理的细胞中的荧光突发可以指示细胞死亡或一些其他氧化事件的进展。
注意检测时平行操作即可。
ROS是多种物质的统称，不像某一单一活性氧指标，无法检测其绝对的含量，只能通过设置参照样本，以参照样本的倍数来反映目标样本相对含量变化，这个“相对”是针对参照的。分析结果是定性的，也是没有单位的，因为它本质上是一个比值（目标/参照）。反映的是模型样本通过具体的干预措施（如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控等）如何影响其ROS的变化，测定其ROS是增加或者降低了。
2.荧光强度在变化？
可以观察到荧光的逐渐增加（由于自动氧化）或减少（由于细胞中的染料损失或光漂白）。在没有任何刺激或诱导的情况下，健康的未经处理的细胞中的荧光突发可以指示细胞死亡或一些其他氧化事件的进展。
注意检测时平行操作即可。
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