细菌过氧亚硝基阴离子(ONOO-)检测试剂盒-红色荧光

BB-461152
选择规格
  • 100T
  • 200T
价格
  • ¥1500元
  • ¥2600元
数量
产品概述 product description

贝博® BBoxiProbe® 细菌过氧亚硝基阴离子(ONOO-)检测试剂盒是一种利用新型荧光探针BBoxiProbe® O58进行细菌中过氧亚硝基阴离子(ONOO-)检测的试剂盒。本试剂盒中的BBoxiProbe® O58过氧亚硝基阴离子(ONOO-)探针为红色荧光的过氧亚硝基阴离子探针,具有516 / 606 nm的最大激发/发射波长。
贝博® BBoxiProbe® O58过氧亚硝基阴离子(ONOO-)探针在细菌中过氧亚硝基阴离子(ONOO-)存在的条件下,被氧化生成红色荧光物质,红色荧光强度与细菌内过氧亚硝基阴离子(ONOO-)水平成正比,检测O58产物的荧光强度就可以知道细菌内过氧亚硝基阴离子(ONOO-)的水平。
在激发波长516 nm,发射波长606 nm附近,使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等可以检测荧光强度的设备,可以方便测定荧光情况,从而测定细菌胞内活性氧水平。
BBoxiProbe® O5系列过氧亚硝基阴离子探针具有多种颜色可以选择,可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本红色荧光检测的试剂盒以外,贝博还可以提供绿色荧光的过氧亚硝基阴离子检测试剂盒(相关产品:BB-46115)以及细菌培养上清的活性氧检测试剂盒(相关产品:BB-475056)。
过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)是活性氧家族的一员,活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。
活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2·-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH·(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。

保存温度
-20℃避光保存
注意事项
1. 探针长期不用可以-20℃保存。
2. 避免反复冻融。可以根据需要分装后冻存。
3. 染色液A为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
4. 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
5. 试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
6个月
检测方法
1. 荧光分光光度计、荧光酶标仪
2. 流式细胞仪
3. 荧光显微镜
4. 激光共聚焦
适用样本
各种革兰氏阳性、阴性细菌
产品特点
1. 使用方便:可用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测;
2. 背景低,灵敏度高;
3. 线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1. 荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪,
激发波长516 nm,发射波长606 nm。
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
试剂准备
1. PBS缓冲液 或者HBSS
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 荧光检测专用的黑色96孔板
使用注意事项
1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2. 荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3. 探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4. 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5. O58在光照和空气中易被氧化,注意避光密封保存。
6. 对不同的细菌样本,应选择合适的孵育时间和浓度,以观察ROS的变化。应根据预实验情况调整染色浓度和时间。
7. 荧光酶标仪检测需要使用荧光检测专用的黑色96孔板。
使用方法
O58探针工作液配制:
1. 根据样本数量,用纯水将探针稀释液B进行10倍稀释。
2. 根据样本数量,用10倍稀释过的探针稀释液B将探针进行1000倍稀释。即配成染色工作液。

O58探针标记:
1. 准备1 ml新鲜待测菌液。
2. 将待测细菌样本离心收集菌体。
3. 用PBS洗涤菌体2-3次。离心收集菌体沉淀。
4. 用500 μl-1 ml染色工作液重悬菌体。
5. 在37℃避光孵育30分钟。
6. 孵育结束后,离心收集菌体。
7. 用PBS清洗细胞一次。离心收集菌体。
8. 用500 μl PBS重悬菌体。充分混匀。
9. 取200 μl加入荧光检测用96孔板。
10. 置于荧光光度计或酶标仪中,后于激发波长为516 nm、发射波长606 nm检测荧光强度。
常见问题分析
1. 过氧亚硝基阴离子(ONOO-)结果如何分析?
通过设置参照样本,以参照样本的倍数来反映目标样本相对含量变化,这个“相对”是针对参照的。分析结果是定性的,也是没有单位的,因为它本质上是一个比值(目标/参照)。反映的是模型样本通过具体的干预措施(如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控等)如何影响其ONOO-的变化,测定其ONOO-是增加或者降低了。
参考文献
Xiqing Cheng, et al.
Biomimetic Metal–Organic Framework Composite-Mediated Cascade Catalysis for Synergistic Bacteria Killing
ACS Applied Materials & Interfaces 2020 (IF=8.758)