2-8℃ 避光

1.开盖后组份按要求条件保存。
2.拆封后请尽快使用完！

3个月

分光光度计

血清、血浆、尿液、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液

1.分光光度计
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

纯水

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1.因组织中NO含量较少，组织匀浆一般为10%或20%，且做好的组织匀浆离心速度为2500rpm/min，离心10分钟，转速不可过高，时间不可太长，样本取样量以0.3-0.5ml为宜。
2.试剂A、试剂B和标准品避免反复冻融，如果需要分多次实验，可以在第一次实验时将试剂A和试剂B、标准品分装后再保存，根据每次实验时的试剂用量取出使用。
3.配好的显色剂避光保存。
4.血清、血浆、组织等样本应新鲜，或者于-80℃以下保存半年以内检测。
5.所有实验用水均需使用不含NO2-的纯水或双蒸水。
6.样本与底物反应完毕后，离心，取上清时千万不可将沉淀吸出，否者影响结果。
7.需使用一次性塑料试管，若没有，使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。

试剂配制
1. 混合试剂的配制：
按试剂 A：试剂 B=1：1配制，用多少配多少，配好后充分混合后待用，现用现配，24小时内有效。
试剂 A，试剂 B使用前请放37℃水浴或室温使其溶解后混匀再用。
2. 试剂E工作液配制：
将试剂E加入90～100℃热双蒸水20 mL中，隔水加热充分溶解；4℃避光保存。
3. 试剂F工作液配制：
使用前将试剂F加入双蒸水8 mL中溶解后备用；4℃避光保存（如颜色变为深咖啡色不可再用）。
4. 显色剂配制：
使用前配制，用多少配多少。试剂 E工作液︰试剂 F工作液︰试剂 G＝2.5︰1︰1。若能在一个月内用完者也可一次配成。剩余显色剂避光保存。室温较低时会有结晶析出，再次使用时，放100℃水浴，反复摇动溶解后使用。
5. 100μmoL/L标准工作液配制：
取0.1 mL标准品（10mmoL/L）用双蒸水定容稀释至10mL（即100倍稀释），混匀，即为100μmol/L标准应用液。现配现用。

样本处理
1. 血清、血浆等液体样本：直接测定
2. 组织：
按照组织质量（g）：提取液体积(ml) =1：5-10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1ml PBS或生理盐水（10%匀浆）进行冰浴匀浆，然后3000g ，4℃离心10分钟，取上清液待测。


1. 计算公式：
血清、血浆中NO含量计算：

NO含量 = 测定管吸光度值-空白管吸光度值 X 标准品浓度 X 样品测试前
（umol/L） 标准管吸光度值-空白管吸光度值 （100umol/L） 稀释倍数

2. 计算举例：
测人血清中NO含量，取人血清100μl进行检测，结果如下，测得空白管吸光度为0.080，标准管吸光度为0.169，测定管吸光度为0.109。血清未稀释，则稀释倍数为1，将数据带入计算公式：
NO含量（umol/L）=（0.109-0.080）/（0.169-0.080）*100umol/L*1=32.584umol/L

参考取样量：
 牛血清、羊血清300ul，兔血清、鼠血清100ul；
 10%组织匀浆一般取500ul；
 细胞悬液一般取500ul，细胞培养液一般取100ul。