一氧化氮检测试剂盒-红色荧光

BB-47014
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产品概述 product description

活性氮（reactive nitrogen species，RNS）是指NO与包括活性氧在内的化合物相互作用,生成一系列包括ONOO•及其质子形式过氧亚硝酸(HOONO)等具有高度氧化活性的自由基和硝基类化合物,这些与活性氧相对应的以NO为中心的衍生物称为活性氮。活性氮主要包括氮氧化物一氧化氮（NO）和二氧化氮（NO2）、过氧化亚硝酰阴离子（ONOO•）、亚硝酰氢（HNO）、亚硝酸根离子（NO2-）和氨等。 贝博® BBoxiProbe® 一氧化氮检测试剂盒是利用NO特异性荧光探针BBoxiProbe® O38进行一氧化氮检测的试剂盒。BBoxiProbe® O38探针可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成O38D。而O38D不能通透细胞膜，从而使探针很容易被标记到细胞内。 在一氧化氮存在的条件下，O38D与一氧化氮反应生成强荧光物质O38F，O38F发出的红色荧光强度与细胞内一氧化氮水平成正比，检测O38F的荧光就可以知道细胞内一氧化氮的水平。O38F的荧光最大激发波长是516nm，最大发射波长是606nm。 贝博® BBoxiProbe® 一氧化氮检测试剂具有高的灵敏度，良好的选择性，短的响应时间，以及可对检测对象在原位进行实时监控和观察等。更重要的是，这种检测技术对细胞内一氧化氮的内源性分布不产生巨大的外加干扰，从而能最大程度地得到内源性一氧化氮变化的真实信息。 在激发波长516 nm，发射波长606 nm附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测O38F 荧光，从而测定细胞内一氧化氮水平。 本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的检测。

保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.探针长期不用可以-20℃保存。
2.避免反复冻融。可以根据需要分装后冻存。
3.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
4.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
5.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦
适用样本
细胞
产品特点
1.使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
2.背景低，灵敏度高；
3.线性范围宽，使用方便。
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套 4.黑色96孔透明底板

使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
5.O38染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
6.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
7.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
8.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
9.酚红对O38荧光探针的检测有干扰，需避免。
10.染色后立即进行分析。
11.以下步骤仅做为参考，稀释比例和孵育时间可根据实际情况来调整。比如，对于某些细胞，如果发现未被刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可降低探针浓度。如果发现用感兴趣的药物刺激后荧光较弱，可升高O38探针浓度，以提高检测的灵敏度。另
使用方法
1. 探针染色工作液配制：
根据样本数量，用HBSS将BBoxiProbe® O38荧光染料200-1000倍稀释，配制成染色工作液。
2. 细胞探针标记
2.1 对于贴壁细胞，可以进行原位标记
1）培养皿/培养板准备细胞样本。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育20分钟～60分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）移除染色液，用PBS（pH7.4）洗涤细胞3次。
4）荧光显微镜（含合适滤片）或流式细胞仪、荧光酶标仪下观察。激发/发射波长为488-535nm / 606nm。

2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液200ul重悬细胞，于生长状态下孵育20分钟～60分钟（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）离心，吸除染色液，加入PBS（pH7.4）重悬细胞，洗涤3次。
4）流式细胞仪、荧光酶标仪检测。激发/发射波长为488-535nm / 606nm。
3. 检测：
对于原位标记探针的样品可以用荧光显微镜，激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接观察亦可。
使用488-535nm激发波长，606nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。

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