2-8℃ 避光

1.开盖后组份按要求条件保存。
2.拆封后请尽快使用完！

3个月

酶标仪

血清、血浆、尿液、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液

1. 酶标仪
2. 恒温水浴锅
3. 离心机
4. 移液器
5. 冰箱
6. 冰盒

纯水

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1. 因组织中NO含量较少，组织匀浆一般为10%或20%，且做好的组织匀浆离心速度为2500rpm/min，离心10分钟，转速不可过高，时间不可太长，样本取样量以0.3-0.5ml为宜。
2. 试剂A、试剂B和标准品避免反复冻融，如果需要分多次实验，可以在第一次实验时将试剂A和试剂B、标准品分装后再保存，根据每次实验时的试剂用量取出使用。
3. 配好的显色剂避光保存。
4. 血清、血浆、组织等样本应新鲜，或者于-80℃以下保存半年以内检测。
5. 所有实验用水均需使用不含NO2-的纯水或双蒸水。
6. 样本与底物反应完毕后，离心，取上清时千万不可将沉淀吸出，否者影响结果。
7. 需使用一次性塑料试管，若没有，使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。

试剂配制
1. 混合试剂的配制：
按试剂 A：试剂 B=1：1配制，用多少配多少，配好后充分混合后待用，现用现配，24小时内有效。
试剂 A，试剂 B使用前请放37℃水浴或室温使其溶解后混匀再用。
2. 试剂E工作液配制：
将试剂E加入90～100℃热双蒸水20 mL中，隔水加热充分溶解；4℃避光保存。
【注】：
 试剂E为过饱和溶液，所以在配制时最好用90～100℃热蒸馏水23ml（热胀冷缩）边隔水加热边用玻璃棒搅拌，以使其充分溶解。一次实验用不完再用时可能仍有结晶，用之前可以再次边隔水加热边玻璃棒搅拌使其溶解。
3. 试剂F工作液配制：
使用前将试剂F加入双蒸水8 mL中溶解后备用；4℃避光保存（如颜色变为深咖啡色不可再用）。
4. 显色剂配制：
使用前配制，用多少配多少。试剂 E工作液︰试剂 F工作液︰试剂 G＝2.5︰1︰1。若能在一个月内用完者也可一次配成。剩余显色剂避光保存。室温较低时会有结晶析出，再次使用时，放100℃水浴，反复摇动溶解后使用。
5. 100μmoL/L标准工作液配制：
取0.1 mL标准品（10mmoL/L）用双蒸水定容稀释至10mL（即100倍稀释），混匀，即为100μmol/L标准应用液。现配现用。

操作步骤：
(一)、血清、尿液、胃液、细胞培养液等样本检测
1. 操作表：
按下表在离心管中加入试剂
2. 计算公式：
血清、血浆中NO含量计算：

NO含量 = 测定管吸光度值-空白管吸光度值 X 标准品浓度 X 样品测试前
（umol/L） 标准管吸光度值-空白管吸光度值 （100umol/L） 稀释倍数


(二)、组织样本检测
1. 操作表：
按下表在离心管中加入试剂

2. 组织样本NO含量计算：
NO含量 = 测定管吸光度值-空白管吸光度值 X 标准品浓度 ÷ 样品蛋白浓度
（umol/gprot） 标准管吸光度值-空白管吸光度值 （20umol/L） （gprot/L）

【注】：
 umol/gprot为微摩尔/克蛋白。
 标准品浓度（20umol/L）----标准管中加入100 μl蒸馏水，加25 μl的100μmoL/L标准工作液，相当于5倍稀释，所以此处标准浓度为20umol/L。