-20℃ 避光

1.开盖后组份按要求条件保存。
2.拆封后请尽快使用完！

6个月

分光光度计

血清、血浆、尿液、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液

1. 可见分光光度计
2. 天平
3. 钵体或匀浆器
4. 离心机
5. 移液器
6. 1ml玻璃比色皿7. 冰盒

纯水

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1.因组织中NO含量较少，组织匀浆一般为10%或20%，且做好的组织匀浆离心速度为2500rpm/min，离心10分钟，转速不可过高，时间不可太长，样本取样量以0.3-0.5ml为宜。
2.血清、血浆、组织等样本应新鲜，或者于-80℃以下保存半年以内检测。
3.所有实验用水均需使用不含NO2-的纯水或双蒸水。
4.样本与底物反应完毕后，离心，取上清时千万不可将沉淀吸出，否者影响结果。
5.需使用一次性塑料试管，若没有，使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。

一、试剂配制
1. 试剂B的准备：试剂B使用之前震荡溶解；
2. 试剂C的准备：试剂C使用之前60℃加热震荡15min；

二、样本的处理：
1. 组织：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，
加入1mL 提取液A）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。

2. 细菌、真菌：
按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 提取液A），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。

3. 体液和培养液等其它液态样品：直接测定。

三、操作步骤：
1. 操作表：

四、NO 含量计算

标准曲线回归方程为：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 9986

1、组织样品：
（1）按样本质量计算
NO 含量 =（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）×10-3
（μmoL/g 鲜重）
= 0.14×（ΔA +0.0103）÷W

（2）按样本蛋白浓度计算
NO 含量 =（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样×Cpr）×10-3
（μmoL/mg prot）
= 0.14×（ΔA +0.0103）÷Cpr

2、细胞：
NO 含量 =（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量）×10-3
（μmol/104 cell）
= 0.14×（ΔA +0.0103）÷细胞数量（万个）

3、其他样品：
NO 含量 =（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷V 样
（μmoL/L）
= 140×（ΔA +0.0103）

V 反总：反应总体积，0.9mL；
V 样：反应中样品体积，0.4mL；
V 样总：加入提取液体积，1mL；
W：样品质量，g；
Cpr：蛋白浓度，mg/mL