2-8℃避光

开盖后组份按要求条件保存。

3个月

分光光度计

血清、血浆、细胞、
组织

1.分光光度计
2.恒温水浴锅
3.漩涡混匀器
4.移液器

纯水

1.离心管
2.吸头
3.试管

1.样本及试剂从冰箱取出，平衡至室温后使用；试剂D 和试剂E 必须37℃水浴至澄清透明，再进行操作，否则会影响结果。
2.试剂A 与配制好的试剂 B 工作液应尽量避免反复冻融。
3.试剂 B 工作液最好现用现配，配好后尽量一日内用完，如有剩余则－20℃以下保存不超过一周；未配制之前的试剂 B1 和B2溶解液均应－20℃以下保存，如淡黄色或白色粉末变成咖啡色或黄褐色颗粒则失效不可用。
4.NOS 活性低，稳定性差，样品或匀浆上清如不马上检测，应置-20℃以下冷冻保存。
5.室温低时，NOS 试剂E 会出现浑浊，如果已经在测试管中加入了 NOS 试剂 E，可将测试管对着灯光，观察有无结晶或浑浊。如果有结晶或浑浊，请将每只测试管放到 37℃水浴锅中晃动 5 分钟，再比色。
6.所有实验用水均需使用纯水或双蒸水。
7.需使用一次性塑料试管，若没有，使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。

试剂配制
1. 试剂A：临用前化冻摇匀。没有用完的试剂，可以－20℃以下避光冷冻保存以备下次再用。
2. 试剂 B 工作液配制：使用前取试剂 B2 溶解液一瓶600ul加入一支试剂B1粉剂中充分混匀（即将 1.5ml 小离心管反复颠倒，并将小离心管尖部的液体离心下来），测试后剩余的试剂可放入－20℃以下冷冻保存，时间不超过一周。
若发现粉剂变成黄褐色或咖啡色，则不可再用。
3. 试剂D：天冷后会凝固，待 37℃水浴变澄清时再使用。
4. 试剂E：室温低时会出现浑浊，待 37℃水浴加热至透明后再用。

操作步骤：
（二）、NOS酶活力计算公式：
A、血清中NOS酶活力计算：：
（1）单位定义：每毫升血清每分钟生成 1nmol NO 为一个酶活力单位。

（2）计算公式：


总NOS活力（U/mL）= 总NOS测定管OD值—空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷1000
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间


=总NOS测定管OD值—空白管OD值 x 2.41+X x 1 ÷1000
38.3x10-6 X 1x15

（3）计算举例：

取血清30ul按操作表进行检测，测得空白管吸光度为0.021，总NOS测定管吸光度为0.287，则计算结果为：

总NOS活力（U/mL）= 总NOS测定管OD值—空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷1000
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间


= 0.287—0.021 x 2.41+0.03 x 1 ÷1000 =37.658 U/mL
38.3x10-6 0.03 1x15

B、组织NOS酶活力计算：

（1）单位定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1nmol NO 为一个酶活力单位。

（2）计算公式

总NOS活力（U/mgprot）= 总NOS测定管OD值—空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间



待测样本蛋白浓度（mgprot/L）



=总NOS测定管OD值—空白管OD值 x 2.41+ X x 1 ÷待测样本蛋白浓度（mgprot/L）
38.3x10-6 X 1x15



= 0.202—0.019 x 2.41+0.05 x 1 ÷（12.5x103）（mgprot/L）=1.254 U/mgprot
38.3x10-6 0.05 1x15

参考取样量：
1. 血清30ul。
2. 10%组织匀浆一般取50-100ul；
3. 细胞悬液一般取500ul，细胞培养液一般取100ul。