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产品概述
product description
NOS 催化 L－Arg 和分子氧反应生成 NO，NO 与亲核性物质生成有色化合物，在 530nm 波长下测定吸光度，根据吸光度的大小可计算出 NOS 活力。 NOS主要有两种类型，结构型（cNOS），依赖钙，诱导性（iNOS）。结构型（cNOS）主要存在于神经元和内皮细胞内，依赖钙；诱导性（iNOS）主要存在于巨噬细胞内，不依赖钙。 贝博TM BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博TM BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbeTM M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
保存温度
2-8℃避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
3个月
检测方法
分光光度计
适用样本
血清、血浆、细胞、
组织
组织
仪器准备
1.分光光度计
2.恒温水浴锅
3.漩涡混匀器
4.移液器
2.恒温水浴锅
3.漩涡混匀器
4.移液器
试剂准备
纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.试管
2.吸头
3.试管
使用注意事项
1.样本及试剂从冰箱取出，平衡至室温后使用；试剂D 和试剂E 必须37℃水浴至澄清透明，再进行操作，否则会影响结果。
2.试剂A 与配制好的试剂 B 工作液应尽量避免反复冻融。
3.试剂 B 工作液最好现用现配，配好后尽量一日内用完，如有剩余则－20℃以下保存不超过一周；未配制之前的试剂 B1 和B2溶解液均应－20℃以下保存，如淡黄色或白色粉末变成咖啡色或黄褐色颗粒则失效不可用。
4.试剂F为过饱和溶液，一次用不完再次使用时可能会有结晶，使用前可以再次边沸水浴边用玻璃棒搅拌使其溶解；
5.NOS 活性低，稳定性差，样品或匀浆上清如不马上检测，应置-20℃以下冷冻保存。
6.室温低时，NOS 试剂E 会出现浑浊，如果已经在测试管中加入了 NOS 试剂 E，可将测试管对着灯光，观察有无结晶或浑浊。如果有结晶或浑浊，请将每只测试管放到 37℃水浴锅中晃动 5 分钟，再比色。
7.所有实验用水均需使用纯水或双蒸水。
8.需使用一次性塑料试管，若没有，使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。
2.试剂A 与配制好的试剂 B 工作液应尽量避免反复冻融。
3.试剂 B 工作液最好现用现配，配好后尽量一日内用完，如有剩余则－20℃以下保存不超过一周；未配制之前的试剂 B1 和B2溶解液均应－20℃以下保存，如淡黄色或白色粉末变成咖啡色或黄褐色颗粒则失效不可用。
4.试剂F为过饱和溶液，一次用不完再次使用时可能会有结晶，使用前可以再次边沸水浴边用玻璃棒搅拌使其溶解；
5.NOS 活性低，稳定性差，样品或匀浆上清如不马上检测，应置-20℃以下冷冻保存。
6.室温低时，NOS 试剂E 会出现浑浊，如果已经在测试管中加入了 NOS 试剂 E，可将测试管对着灯光，观察有无结晶或浑浊。如果有结晶或浑浊，请将每只测试管放到 37℃水浴锅中晃动 5 分钟，再比色。
7.所有实验用水均需使用纯水或双蒸水。
8.需使用一次性塑料试管，若没有，使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。
使用方法
试剂配制
1. 试剂A：临用前化冻摇匀。没有用完的试剂，可以－20℃以下避光冷冻保存以备下次再用。
2. 试剂 B 工作液配制：使用前取试剂 B2 溶解液一瓶600ul加入一支试剂B1粉剂中充分混匀（即将 1.5ml 小离心管反复颠倒，并将小离心管尖部的液体离心下来），测试后剩余的试剂可放入－20℃以下冷冻保存，时间不超过一周。
若发现粉剂变成黄褐色或咖啡色，则不可再用。
3. 试剂D：天冷后会凝固，待 37℃水浴变澄清时再使用。
4. 试剂E：室温低时会出现浑浊，待 37℃水浴加热至透明后再用。
5. 试剂F：使用前请仔细查看，如有结晶附着在瓶壁或瓶底，可将试剂连同瓶子一起在90-100℃热水中摇晃至完全溶解，方可使用。
操作步骤：
（一）、操作表
按下表加入试剂：
（二）、NOS酶活力计算公式：
A、血清中NOS酶活力计算：：
（1）单位定义：每毫升血清每分钟生成 1nmol NO 为一个酶活力单位。
（2）计算公式：
TNOS活力（U/mL）= TNOS测定管OD值—TNOS空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷1000
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间
= TNOS测定管OD值—TNOS空白管OD值x 2.51+X x 1 ÷1000
38.3x10-6 X 1x15
iNOS活力（U/mL）= iNOS测定管OD值—iNOS空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷1000
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间
= iNOS测定管OD值—iNOS空白管OD值x 2.51+X x 1 ÷1000
38.3x10-6 X 1x15
iNOS活力（U/mL）= iNOS测定管OD值—iNOS空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷1000
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间
= 0.149—0.010 x 2.51+0.03 x 1 ÷1000 =20.485U/mL
38.3x10-6 0.03 1x15
B、组织NOS酶活力计算：
（1）单位定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1nmol NO 为一个酶活力单位。
（2）计算公式
TNOS活力（U/mgprot）= TNOS测定管OD值—TNOS空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间
待测样本蛋白浓度（mgprot/L）
= TNOS测定管OD值—TNOS空白管OD值x 2.51+ X x 1 ÷待测样本蛋白浓度（mgprot/L）
38.3x10-6 X 1x15
iNOS活力（U/mgprot）= iNOS测定管OD值—iNOS空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间
待测样本蛋白浓度（mgprot/L）
= iNOS测定管OD值—iNOS空白管OD值x 2.51+ X x 1 ÷待测样本蛋白浓度（mgprot/L）
38.3x10-6 X 1x15
【注】：mgprot为毫克蛋白
1. 试剂A：临用前化冻摇匀。没有用完的试剂，可以－20℃以下避光冷冻保存以备下次再用。
2. 试剂 B 工作液配制：使用前取试剂 B2 溶解液一瓶600ul加入一支试剂B1粉剂中充分混匀（即将 1.5ml 小离心管反复颠倒，并将小离心管尖部的液体离心下来），测试后剩余的试剂可放入－20℃以下冷冻保存，时间不超过一周。
若发现粉剂变成黄褐色或咖啡色，则不可再用。
3. 试剂D：天冷后会凝固，待 37℃水浴变澄清时再使用。
4. 试剂E：室温低时会出现浑浊，待 37℃水浴加热至透明后再用。
5. 试剂F：使用前请仔细查看，如有结晶附着在瓶壁或瓶底，可将试剂连同瓶子一起在90-100℃热水中摇晃至完全溶解，方可使用。
操作步骤：
（一）、操作表
按下表加入试剂：
（二）、NOS酶活力计算公式：
A、血清中NOS酶活力计算：：
（1）单位定义：每毫升血清每分钟生成 1nmol NO 为一个酶活力单位。
（2）计算公式：
TNOS活力（U/mL）= TNOS测定管OD值—TNOS空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷1000
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间
= TNOS测定管OD值—TNOS空白管OD值x 2.51+X x 1 ÷1000
38.3x10-6 X 1x15
iNOS活力（U/mL）= iNOS测定管OD值—iNOS空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷1000
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间
= iNOS测定管OD值—iNOS空白管OD值x 2.51+X x 1 ÷1000
38.3x10-6 X 1x15
iNOS活力（U/mL）= iNOS测定管OD值—iNOS空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷1000
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间
= 0.149—0.010 x 2.51+0.03 x 1 ÷1000 =20.485U/mL
38.3x10-6 0.03 1x15
B、组织NOS酶活力计算：
（1）单位定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1nmol NO 为一个酶活力单位。
（2）计算公式
TNOS活力（U/mgprot）= TNOS测定管OD值—TNOS空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间
待测样本蛋白浓度（mgprot/L）
= TNOS测定管OD值—TNOS空白管OD值x 2.51+ X x 1 ÷待测样本蛋白浓度（mgprot/L）
38.3x10-6 X 1x15
iNOS活力（U/mgprot）= iNOS测定管OD值—iNOS空白管OD值 x反应液总体积 x 1 ÷
呈色物纳摩尔消光系数 取样量 比色光径x反应时间
待测样本蛋白浓度（mgprot/L）
= iNOS测定管OD值—iNOS空白管OD值x 2.51+ X x 1 ÷待测样本蛋白浓度（mgprot/L）
38.3x10-6 X 1x15
【注】：mgprot为毫克蛋白
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