2-8℃保存

开盖后组份按要求条件保存。

6个月

分光光度计

血清、血浆、细胞、组织等

1. 分光光度计（412nm）
2. 低温离心机
3. 匀浆机/匀浆器
4. 移液器
5. 冰箱
6. 冰盒

1. 纯水
2. 丙酮
3. 蛋白定量试剂盒

1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套

1.H2O2标准和反应液应严格密闭保存，避免挥发，否则效率会下降。
2.过氧化物-显色剂复合物黄色沉淀溶解于溶解液时需要一段时间，需完全溶解，否则有可能影响比色结果。
3.本试剂盒亦可用酶标仪进行检测，但检测的样本数相应增加。
4.加入碱性基液、硫酸钛溶液时，应直接加入至溶液中，不要粘到管壁。
5.H2O2标准品A和溶解液D有一定腐蚀性，请小心操作。
6.显色剂C溶解于水后应尽早使用，如暂时不用，可短期放置4℃冰箱保存。亦可用分析天平称取一定量的粉剂，配置5%的浓度即可。

样品处理：
A. 血清（浆）中H2O2含量测定
直接取原液检测

B. 组织中H2O2含量测定
准确称取组织重量，按重量(g):体积（ml）=1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，1g组织加入9ml生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，1000转/分，离心10分钟，取上清匀浆待测。

H2O2 标准品工作液的配制 ：
由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。
本试剂盒提供的H2O2基液的H2O2浓度约为1M，用纯水稀释100倍，使H2O2浓度约为10mM。纯水调零，分光光度计测定A240，根据公式H2O2浓度(mM)=22.94×A240计算出H2O2基液中H2O2的实际浓度，再用丙酮稀释H2O2基液配制10mM H2O2-丙酮标准溶液。
(一般情况下，新配制的10mM H2O2基液A240为0.4~0.45，3个月以后A240为0.35~0.42)

按下表依次稀释（常用浓度0.3~3Mm,即1~5号）：


配制显色溶液：
将0.3g显色剂试剂C小心缓慢的加入至6ml纯水中，即为5%显色剂溶液，4℃避光保存。

测定：
1. 按下表H2O2加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的H2O2浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
【注】：
 加入试剂B、显色剂溶液时，应直接加至溶液中，不要粘到管壁。

2. 充分混匀，室温放置5min。
3. 在4℃ 12000g离心15min，弃上清液，留沉淀。（如有必要可加入预冷丙酮反复洗涤沉淀物）
【注】：
 空白管无需该步骤。
4. 向标准管、测定管的沉淀中加入2ml溶解液D，摇动，使沉淀完全溶解。
【注】：
 空白管无需该步骤。
5. 比色杯光径1cm，以空白调零，以分光光度计测定412nm处系列标准管、测定管的吸光度。
【注】：
 如果没有分光光度计，亦可用酶标仪检测，但如果有条件，尽量采用分光光度计测定。

计算：
以系列丙酮- H2O2溶液(0.3、0.5、0.8、1、3、5、8mM)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程。以测定管吸光度代入回归方程求得待测样品中H2O2含量。

血清（浆）中H2O2含量：
H2O2 (mmol/L)=C0×N

组织中H2O2含量：
H2O2 (mmol/g)=(C0×VT×N)/m

式中：
C0=根据待测样品的吸光度在标准曲线求得H2O2浓度(mM)
VT=待测样品的总体积(L)
m=样品质量(g)
N=样本稀释倍数