过氧化氢（H2O2）检测试剂盒（微孔板，酶标仪）

BB-470312
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产品概述 product description

过氧化氢(H2O2)是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。生命体内积累的H2O2是由一些氧化物催化超氧阴离子发生氧化还原反应而形成，H2O2相对超氧阴离子性质稳定，但其存在可以直接或间接导致细胞膜脂质过氧化损害，加速细胞的衰老和解体，H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。 贝博® BBoxiProbe®过氧化氢(H2O2)检测试剂盒(硫酸钛微板法)其检测原理是H2O2与硫酸肽反应发生的过氧化物-钛复合物黄色沉淀，溶解于强酸中，其黄色深浅与过氧化氢浓度在一定范围内呈线性关系，通过酶标仪测定412nm处吸光度. 本试剂盒主要用于检测血清、血浆、细胞、组织等样品中过氧化氢(H2O2)含量。 本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。

保存温度
2-8℃保存
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
酶标仪
适用样本
血清、血浆、细胞、组织等
仪器准备
1.酶标仪
2.低温离心机
3.移液器
4.匀浆器或钵体

试剂准备
1.纯水等
耗材准备
1.96孔板
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.本试剂盒也可用于分光光估计进行检测，但检测的样本数相应减少；
3.加入碱性基液、硫酸钛溶液时，应直接加入至溶液中，不要粘到管壁；
4.过氧化物-钛复合物黄色沉淀溶解于酸性基液时需要一段时间，需完全溶解，否则有可能影响测定结果；
5.H2O2基液和碱性基液应严格密闭保存，避免挥发，否则效率下降；
6.H2O2基液和酸性基液具有一定的腐蚀性，请小心操作；
7.硫酸钛溶解于水后应尽早使用，如暂时不用，可短期放置4℃冰箱保存，亦可用分析天平称取一定量的粉剂，配置5%的浓度即可；

使用方法

一、 样本的前处理：
1. 组织样本：
取新鲜的组织、清洗干净，擦干、切碎、迅速称取5g，加入5ml预冷的丙酮，在冰浴条件下迅速匀浆或研磨，4℃ 12000g离心20min，收集上清液，测量提取液总体积，4℃保存备用；

2. 血清、血浆、尿液样本：
血清、血浆按常规方法制备后可直接用于本试剂盒的检测，4℃保存；

3. 高活性样本：
如果样本中含有较高浓度的过氧化氢，可以使用丙酮进行恰当的稀释；

二、10mM H2O2标准溶液的配制：
本试剂盒提供的H2O2基液的H2O2浓度约为1M，用纯水稀释100倍，得到H2O2浓度为10mM。
三、硫酸钛溶液的配制：
0.3 g硫酸钛加入6 ml纯水中，即为5%硫酸钛溶液，4℃保存。

四、H2O2加样：
按照下表设置空白管、标准管、样品管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的H2O2浓度过高，可以减少样品用量或者适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。

五、H2O2测定：
混匀，室温放置5min，12000g离心15min，弃上清液，留取沉淀，
如有必要可加入预冷丙酮反复洗涤沉淀物，向各管的沉淀中加入1ml酸性基液、摇动，使沉淀完全溶解。
取各管溶液300ul加入96孔板，空白调零，酶标仪测定412nm处各标准孔、样品孔的吸光度。

六、 计算：
以系列丙酮- H2O2标准（0.3,0.5,0.8,1,3,5,8mM）为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程，以样品孔吸光度代入回归方程求得待测样品中H2O2浓度。

组织样品H2O2 （mmol/g）=（C0 x VT x N）/m
液体样本H2O2 （mmol/L）=C0 x N
公式中：
C0 为 根据待测样本的吸光度在标准曲线求得H2O2浓度（mM）
VT为待测样品的总体积（L）；
m为样品质量；
N为样品稀释倍数

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