冰冻切片活性氧(ROS)检测试剂盒-绿色荧光

BB-470536
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  • 200T
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  • ¥1200元
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产品概述 product description

贝博® BBoxiProbe® 组织切片活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针BBoxiProbe® DCFHDA进行活性氧检测的试剂盒。 BBoxiProbe® DCFHDA本身没有荧光,被活性氧特异性氧化生成绿色荧光物质,绿色荧光强度与活性氧水平成正比,检测绿色荧光就可以知道组织内活性氧的水平。 在激发波长500nm,发射波长525 nm附近,使用荧光显微镜/激光共聚焦检测绿色荧光,从而测定组织内活性氧水平。利用本试剂盒可以快速定性检测样本内活性氧水平变化差异。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 切片样本的活性氧检测一般最好使用振动切片或者新鲜的冰冻切片样本。石蜡切片样本的ROS在切片的的制作过程中会损失掉,有条件的话就使用振动切片或者冰冻切片样本,一般不建议使用石蜡切片样本。已经制备好的石蜡切片样本中残余的ROS也可以用本试剂盒检测。 有条件的话也可以采用直接用组织样本检测,不需要制备成切片的ROS检测试剂盒(相关产品:BB-470537)。 除了绿色荧光的ROS检测试剂盒,贝博® 也可以提供红色、蓝色、深红色等其它颜色的检测试剂盒(相关产品:BB-470522/470523)。 贝博® 还可以为您提供各种组织、细胞样本、切片样本的活性氧、活性氮等各种颜色的检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
激光共聚焦显微镜/荧光显微镜
适用样本
1.新鲜冰冻切片 2.振动切片
3.石蜡切片
产品特点
1.使用方便:可用荧光显微镜直接拍照分析;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光显微镜,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.玻片
4.一次性手套

使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
3.对于某些样本,如果荧光太强,可以按照1:200-1:1000稀释探针。探针标记的时间也可以根据情况在20-60分钟内适当进行调整。
4.以下操作步骤仅供参考,请根据实际样本情况调整。

使用方法

一、 试剂配制
1. 根据样本数,用纯水将BBoxiProbe® DCFHDA活性氧荧光探针200-1000倍稀释,配成染色工作液。
2. 用纯水将10X清洗液10倍稀释,配成1X清洗液工作液。

二、 探针标记
1. 准备待测的厚为10-20 μm的未经固定处理的冰冻切片。
2. 室温下,小心加上200 μl清洗液工作液,铺满整个切片表面,静置5-10分钟。
3. 小心吸除清洗液。
4. 滴加100 μl染色工作液,在37℃培养箱避光孵育20-60分钟。
5. 移除染色液。
6. 用PBS洗涤切片2-3次。
7. 加盖玻片或甘油封片。
8. 荧光显微镜检测。
参考文献
1.Jinjin Jiang, et al.
Combined exposure of fine particulate matter and high-fat diet aggravate the cardiac fibrosis in C57BL/6J mice
Journal of Hazardous Materials 2020 (IF=7.65)

2.Huijie An, et al.
Hydrogen Peroxide-Activatable Nanoparticles for Luminescence Imaging and In Situ Triggerable Photodynamic Therapy of Cancer
ACS Applied Materials & Interfaces 2020 (IF=8.758)

3.Jingyu Song, et al.
Protective effect of Berberine on reproductive function and spermatogenesis in diabetic rats via inhibition of ROS/JAK2/NFκB pathway
Andrology 2020

4.YanYang, et al.
Bruceine D elevates Nrf2 activation to restrain Parkinson’s disease in mice through suppressing oxidative stress and inflammatory response
Biochemical and Biophysical Research Communications 2020

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