过氧化氢检测试剂盒-绿色荧光

BB-470543
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  • 200T
  • 400T
价格
  • ¥900元
  • ¥1600元
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产品概述 product description

贝博® BBoxiProbe® 过氧化氢检测试剂盒是利用过氧化氢特异性荧光探针BBoxiProbe® O34检测过氧化氢的试剂盒。BBoxiProbe® 过氧化氢探针O34是贝博合成的苯蒽类荧光探针,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,与细胞内过氧化氢反应,被氧化生成绿色荧光物质,绿色荧光强度与细胞内过氧化氢水平成正比,检测绿色荧光强度就可以知道细胞内过氧化氢的变化情况。 在激发波长488 nm,发射波长526 nm附近,使用激光共聚焦显微镜、荧光显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测绿色荧光强度,从而测定细胞内过氧化氢水平。 本试剂盒可以用于各种培养细胞的过氧化氢定性检测。 BBoxiProbe® O系列过氧化氢探针具有多种颜色可以选择,可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的绿色荧光探针,贝博还可以提供蓝色、红色、深红色荧光的活性氧检测试剂盒。 过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)是体内的一种活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 状态,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。 贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。 贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。

保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品特点
1.使用方便:可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.过氧化氢O34探针在光照和空气中易被氧化,注意避光密封保存。
6.O34染色工作液必须现配现用,并且在当天用完。
7.BBoxiProbe® O34对湿度非常敏感,若是O34溶液每次取完需要量后,必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量,分装密封保存。不可使用含水的吸头。
8.对不同的细胞,应选择合适的孵育时间和浓度,以观察过氧化氢的变化,很多细胞内的过氧化氢绝对水平较低,需要根据实际情况适当延长孵育时间。
9.过氧化氢O34探针可以根据需要的用量分装后冻存,避免反复冻融。
10.过氧化氢O34不可以一次性全部稀释后长期保存不用,稀释后稳定性变差,有效期缩短。

使用方法
过氧化氢探针BBoxiProbe® O34配制:
根据样本数量计算需要的用量,用试剂B探针稀释液5倍稀释过氧化氢O34探针后充分混匀,避光保存备用。
以下再用无血清培养基或HBSS缓冲盐溶液稀释100-200倍至染色所需的工作液浓度(500-1000倍稀释)。

过氧化氢O34探针标记:
1. 过氧化氢O34溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲盐溶液稀释到所需浓度,终浓度按试剂盒的母液的200-1000倍稀释,以此染色液更换细胞培养液;也可直接向无血清细胞孵育液体中加入过氧化氢O34探针溶液至所需浓度。
2. 依据细胞过氧化氢含量的不同,过氧化氢O34探针终浓度可选择在200-1000倍稀释的范围,一般500倍稀释即可。孵育时间可选择20分钟-4小时,在37℃或室温进行避光孵育。
3. 孵育结束后,用PBS等新鲜溶液清洗细胞。漂洗时间要短。

原位标记:仅适用于贴壁培养细胞。
1. 按照1:500-1000用无血清培养基稀释BBoxiProbe® O34探针。
2. 去除细胞培养基,用PBS洗细胞一次。
3. 加入适当体积稀释好的BBoxiProbe® O34探针。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的BBoxiProbe® O34探针不少于1毫升。
4. 在37℃细胞培养箱内避光孵育20-60分钟。
5. 用无血清细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的BBoxiProbe® O34探针。

收集后标记:悬浮细胞或贴壁细胞消化处理
1. 按照1:500-1000用无血清培养基稀释BBoxiProbe® O34探针。
2. 离心移除培养基,用PBS洗细胞一次。
3. 细胞收集后悬浮于稀释好的BBoxiProbe® O34探针中,细胞浓度为1*106-2*107/毫升,37℃细胞培养箱内避光孵育20-60分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触。
4. 用无血清细胞培养基洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的BBoxiProbe® O34探针。
5. 用无血清细胞培养基重悬细胞。

过氧化氢检测:
1. 对于原位标记探针的样品可以用荧光酶标仪检测,或者用激光共聚焦显微镜、荧光显微镜,直接拍照分析(需要有相关的荧光强度分析软件)。
2. 或收集细胞后标记探针然后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
3. 对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测,用激光共聚焦显微镜直接拍照分析也可以(需要有相关的荧光强度分析软件)。
4. 使用488 nm激发波长,520 nm发射波长,实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。
探针O34的荧光光谱和FITC非常相似,可以用FITC的参数设置检测。
5. 荧光强度强,过氧化氢含量高。
常见问题分析
1.过氧化氢结果如何分析?
通过设置参照样本,以参照样本的倍数来反映目标样本相对含量变化,这个“相对”是针对参照的。分析结果是定性的,也是没有单位的,因为它本质上是一个比值(目标/参照)。反映的是模型样本通过具体的干预措施(如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控等)如何影响其过氧化氢的变化,测定其过氧化氢是增加或者降低了。

2.荧光照片如何分析?
需要有相关的荧光强度分析软件。过氧化氢表达水平直接通过荧光信号的强弱和分布范围来体现。
有的显微镜扫描下来的图像本身就可以测面积和强度,可以同时测不同颜色的荧光强度。有的显微镜不支持此功能,可以将荧光染色彩色图像转换为黑白的灰度图,然后再以灰度值作为测量指标进行分析。
要结合明场的照片具体分析。如果细胞分布均匀可以算固定面积荧光强度。成像时中心和四周有差异时,一般将四周剪切掉也可以。如果细胞分布不匀,需要找到细胞分布匀称的视野,一个视野一个视野找。
如果要用图片做结果,就要平行做多个图片,作分析,统计,每张都要求荧光分布尽量一致。
为了去除杂光的影响,可以适当调节统计荧光的强度范围,将信号过弱的背景杂光去除掉。对照组和实验组整张图片需要做同样的处理,保证所有参数均要一致。
对于不同情况荧光强度的统计方法,根据实验需要或参考文献。可以算等面积的平均强度;也可以算阈值高于一定值的平均强度;也可以算荧光的累积而不算平均。要根据课题需要选择合适的测量统计方法。
参考文献
1.Huijie An et al.
Hydrogen Peroxide-Activatable Nanoparticles for Luminescence Imaging and In Situ Triggerable Photodynamic Therapy of Cancer
ACS Applied Materials & Interfaces 2020 (IF=9.229)

2.Yun Zhang et al.
TGF-β3 Induces Autophagic Activity by Increasing ROS Generation in a NOX4-Dependent Pathway
Mediators of Inflammation 2019 (IF=4.711)

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