过氧化氢检测试剂盒-红色荧光

BB-470546
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产品概述 product description

活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 贝博® BBoxiProbe® 过氧化氢(H2O2)检测试剂盒是一种利用过氧化氢特异性橙红色荧光探针BBoxiProbe® O18进行过氧化氢检测的试剂盒。BBoxiProbe® O18可自由透过活细胞膜进入细胞内,并被细胞内的过氧化氢氧化,产生橙红色荧光产物。根据活细胞中红色荧光的产生,可以判断细胞过氧化氢含量的多少和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察,是一种快速简便的组织或培养活细胞中过氧化氢检测方法。 在激发波长560nm,发射波长575 nm附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光,从而测定细胞内过氧化氢(H2O2)水平。 除了本红色荧光检测试剂盒外,贝博还可以提供绿色荧光的过氧化氢(H2O2)检测试剂(相关产品:BB-470542/470543)。 贝博® BBoxiProbe® 可以提供各种颜色的总活性氧检测产品,以及不同颜色的各种类型活性氧、活性氮的特异性检测产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品特点
1.使用方便:可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.BBoxiProbe® O18探针在光照和空气中易被氧化,注意避光密封保存。
6.对不同的细胞和组织,应选择合适的孵育时间和浓度,以观察过氧化氢的变化。

使用方法
BBoxiProbe® O18探针标记:
1. BBoxiProbe® O18溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲液、PBS缓冲盐溶液稀释到所需浓度,200-1000倍稀释,以此染色工作液更换细胞培养基;也可直接向细胞孵育液体中加入BBoxiProbe® O18探针溶液至所需浓度。
2. 依据细胞过氧化氢含量的不同,BBoxiProbe® O18终浓度可选择在200-1000倍稀释的范围,孵育时间可选择10-90 分钟,在37℃或室温进行避光孵育。
3. 孵育结束后,用新鲜溶液清洗细胞或组织。
4. 用相关仪器进行荧光检测。

荧光显微镜检测:
1. 对贴壁生长细胞或活组织,可直接在荧光显微镜下染色观察;
2. 对悬浮生长细胞,染色后取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上,再盖上一张盖玻片。
3. 荧光显微镜检测。

流式细胞仪分析:
1. 对贴壁生长细胞,用胰酶消化制备成单细胞悬液;对悬浮生长细胞,直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞(5~10万)。
2. 采用560nm波长激发,测定575 nm的发射,过氧化氢阴性细胞仅有很低的荧光强度,过氧化氢阳性细胞有较强的橙红色荧光。

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