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产品概述
product description
贝博® BBoxiProbe® 过氧亚硝基阴离子（ONOO-）检测试剂盒是一种利用荧光探针BBoxiProbe® O71进行过氧亚硝基阴离子检测的试剂盒。O71探针本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，在过氧亚硝基阴离子存在的条件下，O71探针被氧化生成荧光物质O71F，O71F的绿色荧光强度与细胞内过氧亚硝基阴离子水平成正比，检测O71F绿色荧光强度就可以知道细胞内过氧亚硝基阴离子的水平。 在激发波长488 nm，发射波长516 nm附近，使用荧光酶标仪、荧光分光光度计、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等检测O71F 荧光强度，从而测定细胞内过氧亚硝基阴离子水平。 贝博® BBoxiProbe® O71荧光探针对过氧亚硝基阴离子（ONOO-）有较高的选择性，但是也会与活性羟基反应。 本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的检测。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液，在2-8℃时是固体状态，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液，在2-8℃时是固体状态，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
荧光分光光度计/荧光酶标仪/流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
2.贴壁细胞
产品特点
1.使用方便：可用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测或激光共聚焦显微镜直接拍照分析；
2.背景低，灵敏度高；
3.线性范围宽，使用方便。
2.背景低，灵敏度高；
3.线性范围宽，使用方便。
仪器准备
1.荧光分光光度计/荧光酶标仪/流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
5.对于药物作用时间较短(小于2小时)的细胞，可以先标记探针，后用药物刺激细胞。对于药物作用时间较长(6小时以上)的细胞，先用相应的药物刺激细胞，后标记探针。
6.O71染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
7.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
8.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
9.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
10.酚红对O71荧光探针的检测有干扰，需避免。
11.染色后立即进行分析。
12.以下步骤仅做为参考，稀释比例和孵育时间可根据实际情况来调整。比如，对于某些细胞，如果发现未被刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可降低探针浓度。如果发现用感兴趣的药物刺激后荧光较弱，可升高O71探针浓度，以提高检测的灵敏度。另外，探针装载的时间也可以根据情况在15-60分钟内适当进行调整，孵育温度在4℃-37℃内调整。
13.必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。
2.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
5.对于药物作用时间较短(小于2小时)的细胞，可以先标记探针，后用药物刺激细胞。对于药物作用时间较长(6小时以上)的细胞，先用相应的药物刺激细胞，后标记探针。
6.O71染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
7.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
8.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
9.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
10.酚红对O71荧光探针的检测有干扰，需避免。
11.染色后立即进行分析。
12.以下步骤仅做为参考，稀释比例和孵育时间可根据实际情况来调整。比如，对于某些细胞，如果发现未被刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可降低探针浓度。如果发现用感兴趣的药物刺激后荧光较弱，可升高O71探针浓度，以提高检测的灵敏度。另外，探针装载的时间也可以根据情况在15-60分钟内适当进行调整，孵育温度在4℃-37℃内调整。
13.必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。
使用方法
1. 探针染色工作液配制：
根据样本数量，用HBSS将BBoxiProbe® O71荧光染料100-500倍稀释，配制成染色工作液。
2. 细胞探针标记
2.1 对于贴壁细胞，可以进行原位标记
1）培养皿/培养板准备细胞样本。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育20分钟～30分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）移除染色液，用PBS（pH7.4）洗涤细胞3次。
4）荧光显微镜（含合适滤片）或流式细胞仪、荧光酶标仪下观察。最大激发/发射波长为488 / 516 nm。
2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液100-200 μl重悬细胞，于生长状态下孵育20分钟～30分钟（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）离心，吸除染色液，加入PBS（pH7.4）重悬细胞，洗涤3次。
4）流式细胞仪、荧光酶标仪检测。最大激发/发射波长为488 / 516 nm。
3．检测：
对于原位标记探针的样品可以用荧光酶标仪检测，或者荧光显微镜，激光共聚焦显微镜直接拍照分析（需要有相关的荧光强度分析软件）。
或收集细胞后标记探针然后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
使用488 nm激发波长，516 nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。
过氧亚硝基阴离子浓度高则荧光强度强。
BBoxiProbe® O71F的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置进行检测。
根据样本数量，用HBSS将BBoxiProbe® O71荧光染料100-500倍稀释，配制成染色工作液。
2. 细胞探针标记
2.1 对于贴壁细胞，可以进行原位标记
1）培养皿/培养板准备细胞样本。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育20分钟～30分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）移除染色液，用PBS（pH7.4）洗涤细胞3次。
4）荧光显微镜（含合适滤片）或流式细胞仪、荧光酶标仪下观察。最大激发/发射波长为488 / 516 nm。
2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液100-200 μl重悬细胞，于生长状态下孵育20分钟～30分钟（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）离心，吸除染色液，加入PBS（pH7.4）重悬细胞，洗涤3次。
4）流式细胞仪、荧光酶标仪检测。最大激发/发射波长为488 / 516 nm。
3．检测：
对于原位标记探针的样品可以用荧光酶标仪检测，或者荧光显微镜，激光共聚焦显微镜直接拍照分析（需要有相关的荧光强度分析软件）。
或收集细胞后标记探针然后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
使用488 nm激发波长，516 nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。
过氧亚硝基阴离子浓度高则荧光强度强。
BBoxiProbe® O71F的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置进行检测。
参考文献
1.Xiqing Cheng, et al.
Biomimetic Metal–Organic Framework Composite-Mediated Cascade Catalysis for Synergistic Bacteria Killing
ACS Applied Materials & Interfaces 2020 （IF=8.758）
Biomimetic Metal–Organic Framework Composite-Mediated Cascade Catalysis for Synergistic Bacteria Killing
ACS Applied Materials & Interfaces 2020 （IF=8.758）
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