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产品概述
product description
生物体防御体系的抗氧化能力的强弱与健康程度存在着密切联系，这个体系的防护氧化作用主要通过三条途径：消除自由基和活性氧以免引发脂质过氧化；分解过氧化物，阻断过氧化链；除去起催化作用的金属离子。防御体系各成份之间相互起到了协同作用，以及代偿作用与依赖作用。 测定对象中含有许多抗氧化物质，各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平，在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。 贝博TM BBcellProbe® 总抗氧化能力（T-AOC）检测试剂盒测定原理为，总抗氧化物质能使Fe3+还原成Fe2+,后者可与菲啉类物质形成稳定的络合物，通过比色可测出其抗氧化能力的高低。 贝博TM BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博TM BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbeTM M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
分光光度计
适用样本
血清血浆/全血/组织/细胞
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.分光光度计（对应波长的酶标仪）
2.37℃恒温水浴锅
3.涡旋混匀器
4.离心机
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.37℃恒温水浴锅
3.涡旋混匀器
4.离心机
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.生理盐水
2.双蒸水
3.PBS
4.蛋白定量试剂盒
2.双蒸水
3.PBS
4.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.试管
2.吸头
3.离心管
4.96孔板
2.吸头
3.离心管
4.96孔板
使用注意事项
1.试剂C工作液最好现用现配，配好后尽量一日内用完。
2.所有实验用水均需使用纯水或双蒸水。
3.培养细胞上清及部分体液可以参照血清样本处理，一般直接加样。
4.需使用一次性塑料试管，若没有，使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。
2.所有实验用水均需使用纯水或双蒸水。
3.培养细胞上清及部分体液可以参照血清样本处理，一般直接加样。
4.需使用一次性塑料试管，若没有，使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。
使用方法
试剂配制
1. 试剂B工作液配制：每支粉剂加双蒸水120ml充分溶解
2. 试剂C工作液配制：使用时取储备液，用稀释液1 : 19稀释使用，现用现配；
3. 试剂E，低温时会凝固，使用前用37℃水浴融解至澄清液体即可。
操作步骤：
（一） 血清（浆）中T-AOC的测定
1. 操作步骤
（1） 血浆样本前处理：
3500转/分，离心10min，取上清待测，否则有些抗凝剂会引起沉淀及混浊；肝素抗凝的血浆和血清不需要离心
（2） 操作表：
按下表添加试剂：
充分混匀，静置10min。
蒸馏水调零，520nm，1cm光径，测各管吸光度值。
【注】：
X参考取样量：血清（浆）为0.1ml
2. T-AOC活力计算：
（1）T-AOC活力单位定义：
在37℃时，每毫升血清（浆）每分钟使反应体系的吸光度OD值，每增加0.01时，为一个总抗氧化能力单位。
（2）计算公式：
血清（浆）T-AOC能力= 测定管OD值—空白管OD值 ÷30 × 反应液总体积（ml） x 样本测试前
（单位/毫升血清） 0.01 取样量（ml） 稀释倍数
（3）计算举例：
取血清0.1ml按操作表进行检测，以双蒸水调零，测得空白管吸光度为0.053，测定管吸光度为0131，则计算结果为：
血清（浆）T-AOC能力= 0.131—0.053 ÷30 × 3.7 x 1=9.62 单位 / 毫升血清
（单位/毫升血清） 0.01 0.1
(二)、全血中T-AOC能力计算：
操作步骤
（1） 前处理：
将全血按照一定比例用双蒸水进行破碎（一般为全血：双蒸水=1:9），制备溶血液，待测。
（2）操作表：
按下表添加试剂：
充分混匀，静置10min。
蒸馏水调零，520nm，1cm光径，测各管吸光度值。
【注】：
X参考取样量：全血一般用双蒸水1:9稀释取0.05ml。
2. T-AOC活力计算
（1）T-AOC活力单位定义：
在37℃时，每毫升全血每分钟使反应体系的吸光度OD值，每增加0.01时，为一个总抗氧化能力单位。
（2）计算公式：
全血T-AOC能力= 测定管OD值—空白管OD值 ÷30 × 反应液总体积（ml） x 样本测试前
（单位/毫升全血） 0.01 取样量（ml） 稀释倍数
（3）计算举例：
取新鲜小鼠全血1:9用双蒸水稀释，取0.05ml检测，以双蒸水调零，测得空白管为吸光度0.115，测定管为0.213，则计算结果为：
全血T-AOC能力= 0.213—0.115 ÷30 × 3.65 x 10 = 238.467 单位 / 毫升全血
（单位/毫升全血） 0.01 0.05
(三)、组织/细胞中T-AOC能力计算：
1. 操作步骤
（1）样本前处理：
组织匀浆的制备：准确称取组织重量，按重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰浴，制备成10%的匀浆液，2500转/分，离心10min，取上清待测。同时用考马斯亮蓝法测定匀浆蛋白浓度。
培养细胞的前处理：将培养细胞消化、离心、弃上清，留下层细胞，用生理盐水或匀浆介质制备成107/cm3的悬液，即107/ml的悬液，再进行破碎。
破碎细胞的方法有三种：①匀浆器匀浆（可以用匀浆机，也可以用玻璃匀浆器手工匀浆）；②超声粉碎器粉碎；③反复冻融3次（此法对酶活有一定影响）。
制备好的细胞悬液不需要离心，测试加样前摇匀后取样。同时用考马斯亮蓝法测定匀浆蛋白浓度。
（2）操作表：
按下表添加试剂：
充分混匀，静置10min。
蒸馏水调零，520nm，1cm光径，测各管吸光度值。
【注】：
X参考取样量：10%组织匀浆参考取样量为0.1~0.2ml。
2. T-AOC活力计算
（1）T-AOC活力单位定义：
在37℃时，每毫克组织蛋白每分钟使反应体系的吸光度OD值，每增加0.01时，为一个总抗氧化能力单位。
（2） 计算公式：
组织T-AOC能力= 测定管OD值—空白管OD值 ÷30 × 反应液总量 ÷ 匀浆液蛋白浓度
（单位/毫克蛋白） 0.01 取样量 （mgprot / ml）
（3）计算举例：
取10%大鼠肺组织匀浆0.15ml测定，测得空白管为吸光度0.050，测定管为0.214，蛋白浓度为10.5mgprot/ml，则计算结果为：
组织T-AOC能力= 0.214—0.050 ÷30 × 4.05 ÷ 10.5 =1.41单位 / 毫克蛋白
（单位/毫升全血） 0.01 0.15
1. 试剂B工作液配制：每支粉剂加双蒸水120ml充分溶解
2. 试剂C工作液配制：使用时取储备液，用稀释液1 : 19稀释使用，现用现配；
3. 试剂E，低温时会凝固，使用前用37℃水浴融解至澄清液体即可。
操作步骤：
（一） 血清（浆）中T-AOC的测定
1. 操作步骤
（1） 血浆样本前处理：
3500转/分，离心10min，取上清待测，否则有些抗凝剂会引起沉淀及混浊；肝素抗凝的血浆和血清不需要离心
（2） 操作表：
按下表添加试剂：
充分混匀，静置10min。
蒸馏水调零，520nm，1cm光径，测各管吸光度值。
【注】：
X参考取样量：血清（浆）为0.1ml
2. T-AOC活力计算：
（1）T-AOC活力单位定义：
在37℃时，每毫升血清（浆）每分钟使反应体系的吸光度OD值，每增加0.01时，为一个总抗氧化能力单位。
（2）计算公式：
血清（浆）T-AOC能力= 测定管OD值—空白管OD值 ÷30 × 反应液总体积（ml） x 样本测试前
（单位/毫升血清） 0.01 取样量（ml） 稀释倍数
（3）计算举例：
取血清0.1ml按操作表进行检测，以双蒸水调零，测得空白管吸光度为0.053，测定管吸光度为0131，则计算结果为：
血清（浆）T-AOC能力= 0.131—0.053 ÷30 × 3.7 x 1=9.62 单位 / 毫升血清
（单位/毫升血清） 0.01 0.1
(二)、全血中T-AOC能力计算：
操作步骤
（1） 前处理：
将全血按照一定比例用双蒸水进行破碎（一般为全血：双蒸水=1:9），制备溶血液，待测。
（2）操作表：
按下表添加试剂：
充分混匀，静置10min。
蒸馏水调零，520nm，1cm光径，测各管吸光度值。
【注】：
X参考取样量：全血一般用双蒸水1:9稀释取0.05ml。
2. T-AOC活力计算
（1）T-AOC活力单位定义：
在37℃时，每毫升全血每分钟使反应体系的吸光度OD值，每增加0.01时，为一个总抗氧化能力单位。
（2）计算公式：
全血T-AOC能力= 测定管OD值—空白管OD值 ÷30 × 反应液总体积（ml） x 样本测试前
（单位/毫升全血） 0.01 取样量（ml） 稀释倍数
（3）计算举例：
取新鲜小鼠全血1:9用双蒸水稀释，取0.05ml检测，以双蒸水调零，测得空白管为吸光度0.115，测定管为0.213，则计算结果为：
全血T-AOC能力= 0.213—0.115 ÷30 × 3.65 x 10 = 238.467 单位 / 毫升全血
（单位/毫升全血） 0.01 0.05
(三)、组织/细胞中T-AOC能力计算：
1. 操作步骤
（1）样本前处理：
组织匀浆的制备：准确称取组织重量，按重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰浴，制备成10%的匀浆液，2500转/分，离心10min，取上清待测。同时用考马斯亮蓝法测定匀浆蛋白浓度。
培养细胞的前处理：将培养细胞消化、离心、弃上清，留下层细胞，用生理盐水或匀浆介质制备成107/cm3的悬液，即107/ml的悬液，再进行破碎。
破碎细胞的方法有三种：①匀浆器匀浆（可以用匀浆机，也可以用玻璃匀浆器手工匀浆）；②超声粉碎器粉碎；③反复冻融3次（此法对酶活有一定影响）。
制备好的细胞悬液不需要离心，测试加样前摇匀后取样。同时用考马斯亮蓝法测定匀浆蛋白浓度。
（2）操作表：
按下表添加试剂：
充分混匀，静置10min。
蒸馏水调零，520nm，1cm光径，测各管吸光度值。
【注】：
X参考取样量：10%组织匀浆参考取样量为0.1~0.2ml。
2. T-AOC活力计算
（1）T-AOC活力单位定义：
在37℃时，每毫克组织蛋白每分钟使反应体系的吸光度OD值，每增加0.01时，为一个总抗氧化能力单位。
（2） 计算公式：
组织T-AOC能力= 测定管OD值—空白管OD值 ÷30 × 反应液总量 ÷ 匀浆液蛋白浓度
（单位/毫克蛋白） 0.01 取样量 （mgprot / ml）
（3）计算举例：
取10%大鼠肺组织匀浆0.15ml测定，测得空白管为吸光度0.050，测定管为0.214，蛋白浓度为10.5mgprot/ml，则计算结果为：
组织T-AOC能力= 0.214—0.050 ÷30 × 4.05 ÷ 10.5 =1.41单位 / 毫克蛋白
（单位/毫升全血） 0.01 0.15
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