2-8℃ 避光

开盖后组份按要求条件保存。

一年

分光光度计

血清血浆/组织/细胞

1.本试剂盒中试剂均无刺激性气味，对操作人员无任何毒害。
2.快速准确，操作简便，每小时可测100例以上样本。
3.灵敏度高，血清或血浆样品只需0.1 ml，或者更少。
4.再现性好，变异系数CV=1.5%，同一份标本数次测试结果相关极微。
5.呈色稳定，呈色后一天内测吸光度不变。
6.血清样品放置4℃，3~5天内测试结果不变。—20℃以下可保存3个月至半年。
7.测试面广，可测血清、血浆、各种组织匀浆，培养细胞等。
8.不需昂贵与特殊仪器，只需恒温水浴箱或铝锅、铝盆开盖煮沸，及721、722、751、752分光光度计任一型号均可。
9.稳定，不受气温等外界因素的影响。

分光光度计

1.分光光度计（酶标仪）
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰盒

1.纯水
2.PBS
3.无水乙醇、冰醋酸
4.蛋白定量试剂盒

1.试管
2.吸头
3.离心管
4.96孔板

1.必须使用干净的试管。
2.配制试剂时要充分混匀，加样或加试剂时要垂直加入试剂中，避免加到管壁。
3.水浴时间和温度必须固定。水浴前要充分混匀；
4.血浆、血清或尿液样品制备后可以直接用于MDA测定。
5.组织或细胞可以使用PBS或裂解液进行匀浆或裂解。对于组织，组织重量占匀浆液或裂解液的比例为10%；对于细胞，每100万细胞使用0.1ml裂解液或匀浆液。匀浆或裂解后，1600g离心10分钟取上清用于后续测定。匀浆或裂解等样品制备步骤宜在冰浴或4℃进行操作。
6.对于组织或细胞样品，样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的MDA含量。
7.若待测样品吸光度太低，可将95℃水浴时间延长为80分钟。
8.95℃水浴最好用带盖试管，如无带盖试管，可用保鲜膜扎口，水浴时用针扎一小孔。
9.试剂A温度低时会凝固，使用前水浴加热溶解至透明方可使用。
10.测定样品吸光度值较低时，可将水浴延长至80min，但应同时延长，以免造成批间差异。
11.离心沉淀一样要充分，否则会影响吸光度，造成结果不稳定；这种情况可增加离心转速（3000转/分以上）或者延长离心时间使沉淀完全；
12.天冷时，若发现测试溶液呈雾状可以轻轻放水浴箱稍稍加温，待溶液溶解呈透明状用移液器吸取放入比色杯中；若仍然呈雾状，则考虑为高脂血症；

标准操作法
适用样本：
人及各种动植物的样本（包括血清、动植物组织及体液、细胞和细胞培养液等）

试剂准备
试剂B工作液：用前将试剂B 6ml加入170ml纯水混匀，4℃保存。

试剂C工作液：用前将试剂C粉剂溶于30ml热纯水中（90~100℃），混匀（在溶解过程中可适当加热），充分溶解后用纯水补足至30ml再加入30ml冰醋酸，混匀后避光冷藏。

参考取样量：
血清（浆）取0.1-0.2ml；
低密度脂蛋白悬液取0.1~0.2 ml。
肝组织、心肌、肌肉组织、螺旋藻等，取5%或10%匀浆0.1~0.2 ml较好。

标准管参考吸光度：
当标准品取样量为0.1ml时，则标准管吸光度减去标准空白管的吸光度为0.065-0.070；
当标准品取样量为0.2ml时，则标准管吸光度减去标准空白管的吸光度为0.130-0.140；




简易操作方法

适用范围：如果样本数量很多，可以采用以下简易操作方法
人及各种动植物的样本（包括血清、动植物组织及体液、细胞和细胞培养液等）

1. 试剂的配制：
工作液Ⅰ的配制： 试剂A：试剂B工作液：试剂C工作液=X：3:1，现用现配；
工作液Ⅱ的配制： 试剂A：试剂B工作液：50%冰醋酸=X：3:1，现用现配；

微量操作方法
适用范围：
对于MDA含量很低或样本量少的样本可用微量操作方法；
例如小鼠血清（浆），小儿血清（浆），小鼠肺组织、皮肤组织、肾组织、视网膜、细胞及细胞培养液等可用下列方法检测：

样本的前处理：
组织匀浆可制备成10%或5%的匀浆；
注意样本量少，做好的组织匀浆最好不要离心，例如培养的细胞等破碎后可以不离心，取样时注意要摇匀后立即取样；

试剂的配制：
试剂C工作液：
1. 试剂C粉剂溶于30ml热纯水中（90~100℃），混匀（在溶解过程中可适当加热），充分溶解后用纯水补足至30ml再加入30ml冰醋酸，混匀后避光冷藏。
2. 将上述配置好的试剂C溶液用50%冰醋酸按2:1进行稀释，现配现用；配好后的试剂可冰箱冷藏。
【注】：
 50%冰醋酸是50ml纯水加50ml冰醋酸混合而成。
标准管参考吸光度：
当标准品取样量为当标准品取样量为0.1ml时，则标准管吸光度减去标准空白管的吸光度为0.103-0.112
当标准品取样量为0.2ml时，则标准管吸光度减去标准空白管的吸光度为0.206-0.224；

标准操作、简易操作等样本的计算公式

1.血清（浆）中MDA含量的计算公式：
血清中MDA含量（nmol/ml）=（测定管吸光度-测定空白管吸光度）÷（标准管吸光度-标准空白管吸光度）× 标准品浓度10nmol/ml × 样品测试前的稀释倍数

2.组织中MDA含量的计算公式：
组织细胞中MDA含量（nmol/mgprot）=（测定管吸光度-测定空白管吸光度）÷（标准管吸光度-标准空白管吸光度）×标准品浓度10nmol/ml ÷ 样品蛋白浓度（mgprot/ml）

参考值：
1:99的人的红细胞溶血液6.38±0.072 nmol/ml，人血清（浆）4.06±0.6 nmol/ml；
10%大鼠脑匀浆4.72 ±1.44 nmol/mgprot，10%大鼠肾匀浆2.70±0.46 nmol/ mgprot；
10%大鼠肺匀浆1.65 ±0.44 nmol/mgprot，10%大鼠心肌匀浆1.63±0.36 nmol/ mgprot；
10%小鼠脑匀浆16.3 ±5.04nmol/mgprot，5%小鼠心肌匀浆14.64±2.68 nmol/ mgprot；
10%小鼠肌肉匀浆51.59±11.08nmol/mgprot，10%小鼠肝匀浆8.26±2.75 nmol/ mgprot；
小鼠血清（浆）5.30±0.73 nmol/ml；