2-8℃ 避光

开盖后组份按要求条件保存。

6个月

分光光度计

组织、细胞样本

分光光度计

1.分光光度计
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
7.涡旋混匀器

1.纯水
2.生理盐水
3.BCA蛋白定量试剂盒

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.该试剂盒具有微量、灵敏及快速的特点。所用的试管不能含有磷。如果试管放过磷酸或磷酸缓冲液，一定要洗的非常干净，最好用一次性塑料或新玻璃管，避免磷污染是检测成败的关键；
4.定磷剂配好后，不可放置太久，一般保存1-5天，最好现配现用，随时放冰箱；
5.最好采用先配A、B两种混合液，然后按简化操作步骤进行检测。快捷准确。
6.所有配试剂的器皿均要专用，包括吸硫酸的吸管及盛水的器皿。

试剂配制：
粉剂D，用时每支加纯水至5ml，现用现配，剩余的-20℃可存放一周；
粉剂E，用时每支加纯水至5ml，适当加热溶解，4℃冰箱保存；
试剂G，用时每支加纯水至25ml，室温保存；
粉剂H，用时每瓶加纯水至40ml溶解，溶解后4℃冰箱可保存一周；
粉剂I，用时每瓶加纯水至100ml溶解，室温保存；

0.5umol/ml 标准磷工作液的配制：
用时将试剂K储备液用纯水1:19稀释，即取0.5ml储备液加纯水定容至10ml；

定磷剂的配制：
按纯水：2.5mol/L硫酸：试剂H：试剂I=2:1:1:1的比例配制。
配好后的定磷剂应为浅黄色，若无色则试剂无效，若蓝色则为磷污染。
定磷剂需现用现配。

样本的前处理：
准确称取胃黏膜组织重量，按重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下制备成10%的组织匀浆液，2500转/分，离心10min，取上清液，再用生理盐水5倍稀释成2%的浓度待测。

酶活性计算：
1. 定义：规定每小时每毫克组织蛋白的ATP酶分解ATP产生1umol无机磷的量为一个ATP酶活力单位，即微摩尔磷/毫克蛋白/小时（umol Pi/mgprot/hour）

2. 计算公式

H+、K+ -ATPase活力= 测定管OD值 – 对照管OD值X 标准管浓度 X 反应体系中 （U/mgprot） 标准管OD值 （0.5umol/ml） 样本稀释倍数（4.8）

X 6 ÷ 待测样本蛋白含量
（mgprot/ml）

注：
（1）. 反应体系中样本稀释倍数= 反应总体积 = 130+80+40+40+40+50+100 =4.8 倍
取样量 100
（2）. 反应时间为10min，乘以6为1小时。