溶酶体pH值检测试剂盒（绿色荧光）

BB-481215
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产品概述 product description

溶酶体pH（Intracellular pH，pHi）是酶活性和细胞功能的重要生理决定因素，所有蛋白质都依赖于严格调节的pH值以维持其结构和功能。质子 - 去质子化可以指示生物表面的电荷，并且是许多代谢反应中的组成部分。细胞已经开发出多种机制来保持pHi的窄范围，以响应pH值的细胞内和细胞外波动。 贝博TM BBcellProbe® 溶酶体pH值检测试剂盒采用BBcellProbe® P02溶酶体pH值荧光探针检测溶酶体pH值的变化。BBcellProbeTM P02是pH敏感的荧光染料，在采用黄绿色发射光检测时，其荧光强度随着pH值降低而增强，反之碱性条件下变低，从而BBcellProbe® P02可被用于监测溶酶体pH变化，见图一。 市面上现有的pH探针不适用于研究酸性细胞器如溶酶体，内涵体，精子和顶体，因为它们的荧光在较低pH下显著降低。另外，市面上现有的pH探针不能选择性地定位于酸性细胞器中。贝博TM BBcellProbe® P02是贝博研发的适合溶酶体pH检测的荧光探针，它是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，是一种嗜酸性的荧光染料，它在较低的pH下发出强烈的黄绿色荧光。P02进入细胞后，会产生特异性的溶酶体聚集。产生的荧光物质最大激发波长为 385nm，最大发射波长为 540nm，其在不同的pH值条件下发射的荧光强度不同，从而可以反映溶酶体pH值的变化情况。 BBcellProbe® P02主要用于哺乳动物细胞的研究。在有溶酶体pH变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中也可应用。实际检测时推荐使用的激发波长为380-405nm左右，发射波长为 525～550nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测溶酶体pH值的变化。

保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.探针液长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.探针液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
3.探针A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
4.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
5.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期
6个月
检测方法
流式细胞仪//激光共聚焦/荧光显微镜
适用样本
细胞
产品应用
流式细胞仪//激光共聚焦/荧光显微镜
仪器准备
1.流式细胞仪或激光共聚焦或荧光显微镜
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 2.HBSS 3. （备选）Nigericin sodium salt（相关产品BB-94002）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
2.pH探针为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.BBcellProbe® P02探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。
4.吸取BBcellProbe® P02探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
5.未使用完的BBcellProbe® P02探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
6.BBcellProbe® P02探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。
7.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
8.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
9.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
10.染色后立即进行分析。
11.可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液，Pluronic F127 可以帮助BBcellProbe® P02更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存BBcellProbe® P02溶液。
12.本试剂盒主要用于溶酶体pH值变化的定性检测。但是在一定pH值范围内荧光强度与溶酶体pH有良好的线性关系，从而可以换算出溶酶体的pH值的具体数据。如果需要制备标准曲线换算溶酶体pH值数值，可以联系贝博技术邮箱bestbio@163.com索取参考方法。
使用方法
1. 染色工作液的配制：
根据样品数，用探针稀释液将P02探针进行10倍稀释， 然后再用HBSS缓冲液稀释 BBcellProbe® P02溶液50倍-100倍，配制成BBcellProbeTM P02染色工作液。
2. 将 BBcellProbe® P02染色工作液加入已处理好的细胞，在37℃孵育1-5 分钟。
3. 然后用该细胞进行荧光溶酶体pH变化情况检测。
激发波长 360-405nm，发射波长525-550nm。
参考文献
1.Weitao Su, et al.
Interaction between PHB2 and Enterovirus A71 VP1 Induces Autophagy and Affects EV-A71 Infection
Viruses 2020

2.Tiezhu, et al.
SNX11 Identified as an Essential Host Factor for SFTS Virus Infection by CRISPR Knockout Screening
Virologica Sinica 2019

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