线粒体膜通透性转换孔(MPTP)检测试剂盒

BB-48122
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  • 100T
  • 200T
价格
  • ¥2900元
  • ¥4200元
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产品概述 product description

贝博® BBcellProbe® M61线粒体膜通透性转换孔(Mitochondrial Permeability Transition Pore;MPTP)检测试剂盒采用BBcellProbe® M61粒体膜通透性转换孔荧光探针检线粒体膜通透性转换孔的激活情况。 线粒体膜通透性转换孔(mitochondrial permeablity transition pore,mPTP),又称线粒体巨型通道(magachannel),是存在于线粒体内外膜之间的一组蛋白复合体,由多种蛋白质复合组成,是存在于线粒体内

保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。 2.试剂A和试剂C为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
一年
检测方法
流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦/荧光酶标仪/荧光光度计
适用样本
细胞
产品应用
流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦/荧光酶标仪/荧光光度计
仪器准备
1.流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦/荧光酶标仪/荧光光度计 2.离心机 3.移液器 4.冰箱 5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 2.HBSS
耗材准备
1.离心管 2.吸头 3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。 2.BBcellProbe® M61探针和阳性诱导剂为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。 3.BBcellProbe® M61探针为了便于观察防止误操作导致损失,在试剂盒中时是采用透明管包装,收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。 4.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。 5.染色后立即进行分析。 6.标记的条件因细胞种类而异,根据不同样本的实际染色结果做相应调整,在每次实验前,请先确定最佳条件。以下方法仅供参考。 7.BBcellProbe® M61探针容易受潮,受潮后稳定性较差,注意干燥保存。 8.吸取BBcellProbe® M61探针母液时要用干燥的新吸头,不能使用含水的吸头。 9.未使用完的BBcellProbe® M61探针母液请拧紧螺旋盖,避免受潮失效。 10.BBcellProbe® M61探针工作液含水,配制后不可以长期保存,须现配现用。 11.阳性诱导剂配制工作液后可以保存。 12.M61探针和阳性诱导剂融解后离心至管底部再打开螺旋盖,防止开盖时损失。
使用方法
试剂配制: 1. BBcellProbe® M61染色工作液(I)配制: 根据样品数量用试剂D稀释液稀释 BBcellProbe® M61探针5倍,配制成BBcellProbe® M61染色工作液(I)染色液,充分混匀。 2. 阳性诱导剂工作液(II)配制: 根据样品数量用试剂D稀释液10倍稀释 阳性诱导剂(10X),配制成1X 阳性诱导剂工作液(II),充分混匀。 细胞染色 1. 用HBSS将样品细胞制备成单细胞悬液,使其密度为1×106细胞/ml以上。 2. 按照500ul每管制备细胞悬液,并记录编号。 后续染色顺序: 1号管仅含BBcellProbe® M61探针(阴性对照,选做); 2号管含BBcellProbe® M61探针和荧光淬灭剂(待测样品细胞); 3号管含BBcellProbe® M61探针,荧光淬灭剂和阳性诱导剂(阳性性对照,选做); 另外需要准备一管不加以上试剂的细胞样品(4号管)用于流式仪器设置。 3. 向上述每个样品的细胞中分别加入5µl BBcellProbe® M61染色工作液(I)并充分混匀。 4. 将所有1号2号3号样品管在37℃避光孵育15分钟。 5. 向2号、3号管中加入5ul荧光淬灭剂,并混匀。 6. 向3号管中加入5µl-10ul 阳性诱导剂工作液(II),并充分混匀。 7. 将所有1号2号3号样品管在37℃避光孵育15分钟。 8. 离心力1000×g以下离心5分钟收集细胞。 9. 用500µl HBSS重悬细胞。 10. 染色后,将样品置于冰上,1小时内进行流式分析。 细胞检测 用不含试剂的细胞样品(4号管)进行流式仪器设置。 用流式488nm激发器进行荧光分析,BBcellProbe® M61探针最大激发波长495nm,最大发射波长515nm。 1号管-仅含BBcellProbe® M61探针:线粒体和胞浆有荧光,荧光信号较强; 2号管-含BBcellProbe® M61探针和淬灭剂:仅线粒体呈现荧光,荧光强度居中; 3号管-含BBcellProbe® M61探针,荧光淬灭剂和阳性诱导剂:阳性对照细胞。线粒体和胞浆荧光均被淬灭,荧光信号最弱。 2号管荧光信号强度的变化说明线粒体通透性转换孔被激活的情况。
参考文献
1.Weiqi Wu et al. Kaempferol protects mitochondria and alleviates damages against endotheliotoxicity induced by doxorubicin Biomedicine & Pharmacotherapy 2020 (IF=3.743) 2.Qing Zhou et al. Tetramethylpyrazine alleviates iron overload damage in vascular endothelium via upregulating DDAHII expression Toxicology in Vitro 2020 (IF=3.067) 3.Xiaomin Zhao et al. Circular RNA CircEZH2 Suppresses Transmissible Gastroenteritis Coronavirus-induced Opening of Mitochondrial Permeability Transition Pore via Targeting MiR-22 in IPEC-J2 International Journal of Biological Sciences 2019 (IF=4.067) 4.Siqi Zhou et al. Magnolol induces apoptosis in osteosarcoma cells via G0/G1 phase arrest and p53‐mediated mitochondrial pathway Journal of Cellular Biochemistry 2019 (IF=3.448) 5.Jing Ye et al. Diosbulbin B-Induced Mitochondria-Dependent Apoptosis in L-02 Hepatocytes is Regulated by Reactive Oxygen Species-Mediated Autophagy Frontiers in Pharmacology 2019 (IF=3.845)

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