2-8℃ 避光

1.长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。 2.试剂A和试剂C为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

一年

流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦/荧光酶标仪/荧光光度计

细胞

流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦/荧光酶标仪/荧光光度计

1.流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦/荧光酶标仪/荧光光度计 2.离心机 3.移液器 4.冰箱 5.冰盒

1.PBS缓冲液 2.HBSS

1.离心管 2.吸头 3.一次性手套

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。 2.BBcellProbe® M61探针和阳性诱导剂为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。 3.BBcellProbe® M61探针为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。 4.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。 5.染色后立即进行分析。 6.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。以下方法仅供参考。 7.BBcellProbe® M61探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。 8.吸取BBcellProbe® M61探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。 9.未使用完的BBcellProbe® M61探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。 10.BBcellProbe® M61探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。 11.阳性诱导剂配制工作液后可以保存。 12.M61探针和阳性诱导剂融解后离心至管底部再打开螺旋盖，防止开盖时损失。

试剂配制： 1. BBcellProbe® M61染色工作液（I）配制： 根据样品数量用试剂D稀释液稀释 BBcellProbe® M61探针5倍，配制成BBcellProbe® M61染色工作液（I）染色液，充分混匀。 2. 阳性诱导剂工作液（II）配制： 根据样品数量用试剂D稀释液10倍稀释 阳性诱导剂（10X），配制成1X 阳性诱导剂工作液（II），充分混匀。 细胞染色 1. 用HBSS将样品细胞制备成单细胞悬液，使其密度为1×106细胞/ml以上。 2. 按照500ul每管制备细胞悬液，并记录编号。 后续染色顺序： 1号管仅含BBcellProbe® M61探针（阴性对照，选做）； 2号管含BBcellProbe® M61探针和荧光淬灭剂（待测样品细胞）； 3号管含BBcellProbe® M61探针，荧光淬灭剂和阳性诱导剂（阳性性对照，选做）； 另外需要准备一管不加以上试剂的细胞样品（4号管）用于流式仪器设置。 3. 向上述每个样品的细胞中分别加入5µl BBcellProbe® M61染色工作液（I）并充分混匀。 4. 将所有1号2号3号样品管在37℃避光孵育15分钟。 5. 向2号、3号管中加入5ul荧光淬灭剂，并混匀。 6. 向3号管中加入5µl-10ul 阳性诱导剂工作液（II），并充分混匀。 7. 将所有1号2号3号样品管在37℃避光孵育15分钟。 8. 离心力1000×g以下离心5分钟收集细胞。 9. 用500µl HBSS重悬细胞。 10. 染色后，将样品置于冰上，1小时内进行流式分析。 细胞检测 用不含试剂的细胞样品（4号管）进行流式仪器设置。 用流式488nm激发器进行荧光分析，BBcellProbe® M61探针最大激发波长495nm，最大发射波长515nm。 1号管-仅含BBcellProbe® M61探针：线粒体和胞浆有荧光，荧光信号较强； 2号管-含BBcellProbe® M61探针和淬灭剂：仅线粒体呈现荧光，荧光强度居中； 3号管-含BBcellProbe® M61探针，荧光淬灭剂和阳性诱导剂：阳性对照细胞。线粒体和胞浆荧光均被淬灭，荧光信号最弱。 2号管荧光信号强度的变化说明线粒体通透性转换孔被激活的情况。

1.Weiqi Wu et al. Kaempferol protects mitochondria and alleviates damages against endotheliotoxicity induced by doxorubicin Biomedicine & Pharmacotherapy 2020 （IF=3.743） 2.Qing Zhou et al. Tetramethylpyrazine alleviates iron overload damage in vascular endothelium via upregulating DDAHII expression Toxicology in Vitro 2020 （IF=3.067） 3.Xiaomin Zhao et al. Circular RNA CircEZH2 Suppresses Transmissible Gastroenteritis Coronavirus-induced Opening of Mitochondrial Permeability Transition Pore via Targeting MiR-22 in IPEC-J2 International Journal of Biological Sciences 2019 （IF=4.067） 4.Siqi Zhou et al. Magnolol induces apoptosis in osteosarcoma cells via G0/G1 phase arrest and p53‐mediated mitochondrial pathway Journal of Cellular Biochemistry 2019 （IF=3.448） 5.Jing Ye et al. Diosbulbin B-Induced Mitochondria-Dependent Apoptosis in L-02 Hepatocytes is Regulated by Reactive Oxygen Species-Mediated Autophagy Frontiers in Pharmacology 2019 （IF=3.845）