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细胞粘附是指细胞与细胞之间及细胞与细胞外基质之间的粘附，细胞粘附是细胞维持形态结构与功能的生物现象，是细胞间信息交流的一种形式。而信息交流的可溶递质称细胞粘附分子(cell adhesion molecule,CAM)。细胞粘附分子是参与细胞与细胞之间及细胞与细胞外基质之间相互作用的分子。 是一类独立的分子结构，是通过识别与其粘附的特异性受体而发生相互间的粘附现象。 细胞的生长、发育、分化及代谢状态和外界细胞因子、炎症介质反应等均可以影响细胞粘附，细胞粘附也可能是肿瘤细胞易发生浸润、转移等现象的分子基础。 贝博® BBcellProbe® 细胞粘附检测试剂盒含全套试剂，通过贝博活细胞染色探针BBcellProbe® W16染色粘附的活细胞数量来反应细胞的粘附能力变化。 本试剂盒不含有包被液。本试剂盒使用比色法进行检测，如果需要荧光法检测的，请选用贝博货号为BB-48123的试剂盒。 本试剂盒适合进行常规的总体粘附性能的检测。不含有包被剂，如果需要含包被剂的，可以选用贝博货号为BB-48120的试剂盒。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
2.染色液避免反复冻融。
3.染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
2.快速：最快1小时内即可完成实验；
3.灵敏：数据可靠，重现性好，线性范围更宽；
4.准确：试剂本身稳定性高，实验结果稳定可靠。
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.吸头
3.一次性手套
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小，重悬细胞是动作要轻柔，避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
3.染色培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。一般情况下，白细胞较难染色，因此需要较长的培养时间。培养时间一般为1- 4小时，但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察染色程度 (根据细胞种类而定，需要摸索一下条件)。当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入染色液B。
4.有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加染色液B试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰O.D值读数。
5.OD值在0.4-2.0之间均可，最大值控制在1.0左右为宜，小于0.4或大于2.0请调整接种量和培养时间。
包被：
1. 根据细胞类型，96孔板每孔加入100ul Matrigel或Fibronectin包被液。
2. 将培养板置2-8°C过夜。
3. 移除包被液。
4. 用培养基洗涤1-3次。
细胞接种：
1. 待测定细胞处理好后，用胰酶消化，PBS洗涤，然后用相应培养基重悬，制成细胞悬液。
2. 按5×104细胞/孔接种96孔板，建议设3-5个复孔。同时设立对照组，即孵育后不弃上清组。
3. 放37℃培养箱孵育30分钟-1小时。
4. 取出培养板，吸弃培养基。
5. 然后用相应的培养基或洗涤液洗涤2-3次。
6. 每孔加入100ul新鲜培养基。
粘附率检测：
1. 96孔板每孔加入10ul细胞染色液A。
2. 37℃孵育30分钟-4 小时。
3. 测定样品孔OD值。测定450 nm各孔的吸光值，如无450nm检测波长，可以使用450-490nm的检测波长。
4. 细胞粘附率计算。
将各测试孔的OD值减去空白孔（未加细胞孔）OD值。各重复孔的OD值取平均数。
细胞粘附率% =（（待测细胞OD - 空白OD）/（对照细胞OD - 空白OD））×100
Protective effect of KLF15 on vascular endothelial dysfunction induced by TNF‑α
Molecular Medicine Reports 2018
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