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产品概述
product description
贝博® BBcellProbe® 细胞自噬检测试剂盒是采用M53染色法染色细胞内自噬体的检测试剂盒，该产品可代替传统LC3-GFP法，通过荧光示踪物来选择性检测自噬通路中的各种囊泡包括自噬前体、自噬体和自噬溶酶体，无需转染，就能在荧光显微镜下跟踪活细胞的自噬过程进行分析，或用流式细胞仪进行高通量筛选，甚至能标记原代细胞。并且该产品可以进行自噬通路的动力学分析，为研究者展现自噬体形成和消除之间的动态平衡。
贝博® BBcellProbe® 细胞自噬检测试剂盒中的BBcellProbe® M53自噬体染色
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.染料长期不用可以-20℃保存。
2.避免反复冻融。
2.避免反复冻融。
有效期
一年
检测方法
激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪
适用样本
动物细胞
产品特点
1.无需转染，可在活细胞内定量检测细胞自噬情况，可在活细胞内定量检测自噬小泡和监控活细胞自噬流（自噬体的合成、自噬底物到溶酶体的运输、自噬底物在溶酶体的降解过程）；
2.适用于流式细胞检测和显微镜分析；
3.可用于高通量筛选自噬的激活剂和抑制剂；
4.可选择性地对前自噬体、自噬体和自噬性溶酶体进行染色，而对溶酶体染色较少。
2.适用于流式细胞检测和显微镜分析；
3.可用于高通量筛选自噬的激活剂和抑制剂；
4.可选择性地对前自噬体、自噬体和自噬性溶酶体进行染色，而对溶酶体染色较少。
产品应用
激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪
仪器准备
1.激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液 或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1. 预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2. 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使溶液集中于管底。
3. 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
4. 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
5. 染色后立即进行分析。
6. 自噬过程很快，通常被诱导后8分钟即可观察到自噬体（autophagosome）形成，2小时后自噬溶酶体（autolysosome）基本降解消失。
2. 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使溶液集中于管底。
3. 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
4. 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
5. 染色后立即进行分析。
6. 自噬过程很快，通常被诱导后8分钟即可观察到自噬体（autophagosome）形成，2小时后自噬溶酶体（autolysosome）基本降解消失。
使用方法
1. 染色工作液配制：
根据样本数量，用检测缓冲液将M53荧光染料10倍稀释，再用相应的培养基或者HBSS缓冲液50倍稀释，配制成染色工作液。
2. 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含M53探针工作液。于生长状态下孵育30 -120分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。
3）利用新鲜培养基或PBS替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。
2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育30 -120分钟（具体时间需根据细胞类型而定）。
3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液或PBS重悬细胞。
4）置于荧光镜下观察或流式检测。
3. 观察结果：
在荧光显微镜（含合适滤片）/酶标仪/流式细胞仪下观察细胞。
最大激发/发射波长为576nm / 590 nm。
根据样本数量，用检测缓冲液将M53荧光染料10倍稀释，再用相应的培养基或者HBSS缓冲液50倍稀释，配制成染色工作液。
2. 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含M53探针工作液。于生长状态下孵育30 -120分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。
3）利用新鲜培养基或PBS替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。
2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育30 -120分钟（具体时间需根据细胞类型而定）。
3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液或PBS重悬细胞。
4）置于荧光镜下观察或流式检测。
3. 观察结果：
在荧光显微镜（含合适滤片）/酶标仪/流式细胞仪下观察细胞。
最大激发/发射波长为576nm / 590 nm。
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